8.3.84 메텐아민(Methenamine)

1) 시험법 적용범위

축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중의 분석대상물질을 10 mM 개미산암모늄이 함유된 아세토니트릴로 추출한 뒤 헥산과 황산마그네슘, 일차 이차 아민(Primary secondary amine, PSA)으로 정제한 후 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 표준품을 100 mL 용량플라스크에 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다..

라) 표준용액 : 표준원액을 메탄올로 희석하여 적당한 농도가 되게 한다.

마) 10 mM 개미산암모늄(Ammonium formate)을 함유한 물 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산암모늄 0.63 g을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

바) 10 mM 개미산암모늄(Ammonium formate)을 함유한 아세토니트릴 : 1,000 mL 용량플라스크에 0.63 g의 개미산암모늄을 넣고 20 mL의 물로 잘 녹인 뒤 아세토니트릴로 표시선까지 채운다.

사) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화된 검체 5 g을 50 mL 원심분리관에 취하고 10 mM 개미산암모늄을 함유한 아세토니트릴 20 mL을 가하여 15분간 진탕 혼합한 후 4℃, 2,600G에서 15분간 원심 분리한다. 상층액을 50 mL 원심분리관에 취하여 20 mL 헥산을 넣어 10분간 진탕 혼합하고 4℃, 2,600G에서 15분간 원심분리한다. 하층액을 15 mL 원심분리관에 취하고 황산마그네슘 900 mg과 PSA 50 mg을 넣고 5분간 진탕 혼합한 뒤 2,600G에서 15분간 원심 분리한다. 상층액을 취하여 40℃에서 0.5 mL가 될 때까지 질소농축한 후 아세토니트릴 1.5 mL을 가한 뒤 재분산한다. 4℃, 15,000G에서 10분간 원심분리 한 후 상층액을 0.45 μm 필터(Polytetrafluoroethylene, PTFE)로 여과시킨 것을 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：XBridge HILIC (2.1 × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A : 10 mM 개미산암모늄을 함유한 물

(나) 이동상 B : 아세토니트릴(ACN)

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	25	75
10	25	75

(3) 유속 : 0.2 mL/분

(4) 칼럼온도 : 35℃

(5) 주입량 : 10 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI(Positive)

(2) Capillary temperature : 350℃

(3) Collision gas : N2(질소)

(4) 분석대상물질 조건

물질명 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
메텐아민 (Methenamine)	3.74	140.19	141.176	112.0	17
				42.1	37
				85.1	21

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성시험

가) 정성

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Response ratio)을 비교하여 그 비율이 20～30% 이내에서 일치하여야 한다. ※주1 참조

주1. 생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50%	≤ 20%
20% ～ 50%	≤ 25%
> 10% ～ < 20%	≤ 30%

나) 표준품 크로마토그램

그림 1. 메텐아민(3.74분) 표준품의 크로마토그램 (0.01 mg/kg)

8) 정량시험

가) 정량

정성시험과 똑같은 조건에서 표준용액을 일정농도로 제조한 후 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(Quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 각각 정량한다.

나) 정량한계

메텐아민(Methenamine) : 0.002 mg/kg