7.3.1.5 아바멕틴 등 26종 다성분 시험법

가. 시험법 적용범위닭고기, 알 등축산물에적용한다.

나. 분석원리시료를 1% 아세트산 함유 아세토니트릴로 추출하고, 원심분리하여 상층액을 취해 PSA(Primary Secondary Amine), C18및 GCB( Graphitized Carbon Black )를 이용하여 정제한 후 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치

1)액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액 : 표준품을 메탄올에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액 : 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함)

5) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료(닭의 경우 피부와 뼈, 내장 제거한 근육 부위 100 g, 알의 경우 달걀, 오리알은 10개, 메추리알 20개 또는 이와 동등한 양)를 균질화한 후5 g을 정확히 달아 50 mL 용량 원심분리관에 넣고 1% 아세트산이 함유된 아세토니트릴 15 mL를 넣어1분간강하게흔들어 섞어 추출한다. 원심분리관에 무수황산마그네슘 6 g과 무수아세트산나트륨 1.5 g을 차례로 넣고 10분간 강하게흔들어 섞은 후 4℃, 4,000 G에서 10분간 원심분리한다.

2) 정제
새로운15 mL 용량 원심분리관에 무수황산마그네슘 1,200 mg, C 18400 mg, PSA 400 mg과 GCB 45 mg 을 넣고 ‘1)추출’로부터 얻은 용액 중 상층액 6 mL를 넣고 1분간 강하게흔들어 섞은 후 4℃, 4000 G에서 10분간 원심분리한다. 상층액 중 3 mL를 취하여 질소를 이용하여 농축, 건고한 후 잔류물에 메탄올을1 mL를 넣어녹인다. 추출액을 멤 브레인 필터(nylon 재질, 0.2 μm)로 여과하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가)컬럼: C18계 역상 컬럼또는 이와 동등한 것

나)컬럼 온도: 40℃

다) 이동상

(1) 이동상 A : 0.1% 포름산 함유 메탄올

(2) 이동상 B : 0.1% 포름산 및 5 mM 아세트산암모늄 함유 물

(3) 농도구배조건

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	5	95
3.0	90	10
7.0	90	10
7.1	5	95
12.0	5	95

라) 이동상유속: 0.2 mL/분

마) 주입량 : 2 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법 : ESI positive 및 negative ion mode

나) Capillary voltage : 5.5 kV

다) Collision gas : 질소(N2) 또는 아르곤(Ar)

라) 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

	분석성분 (Compound)	이온화 (Ionizationmode)	머무름시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursorion,m/z)	생성이온 (Product ion,m/z)	충돌 에너지 (Collisionenergy, eV)
1	2,4-디메틸아닐린*** (2,4-Dimethylaniline)	+	3.53	121.2	121.0	122	1071)	21
							105	23
							77	37
2	아바멕틴* (Abamectin)	+	6.78	873.1	872.4	891	3051)	31
							95	95
							568	19
3	아미트라즈*** (Amitraz)	+	6.76	293.4	293.1	294	1631)	23
							107	57
							106	83
4	카바릴 (Carbaryl)	+	4.56	201.2	201.0	202	1451)	15
							127	41
							117	33
5	클로티아니딘 (Clothianidin)	+	3.73	249.7	249.0	250	1691)	17
							132	23
							113	35
6	사이퍼메트린 (Cypermethrin)	+	6.55	416.3	415.0	433	1911)	21
							127	43
							91	69
7	다이아지논 (Diazinon)	+	5.56	304.3	304.1	305	1691)	29
							153	27
							97	43
8	디클로르보스*** (Dichlorvos)	+	4.47	221.0	219.9	221	1091)	23
							79	37
							95	47
9	에톡사졸 (Etoxazole)	+	6.33	359.4	359.1	360	1411)	43
							113	85
							304	25
10	페니트로티온 (Fenitrothion)	+	3.95	277.2	277.0	295	1741)	19
							154	45
							278	9
11	페노뷰카브 (Fenobucarb)	+	4.95	207.3	207.1	208	951)	19
							77	53
							152	11
12	펜설포티온 (Fensulfothion)	+	4.71	308.4	308.0	309	2811)	21
							253	25
							173	33
13	피프로닐 (Fipronil)	+	5.25	437.1	435.9	437	3681)	25
							255	41
							290	37
14	피프로닐설폰 (Fipronil sulfone)	-	5.34	453.2	451.9	451	4151)	24
							282	38
							244	64
15	플루페녹수론 (Flufenoxuron)	+	6.22	488.8	488.0	489	1581)	27
							141	71
							113	103
16	아이소펜포스 (Isofenphos)	+	5.60	345.4	345.1	346	2451)	17
							217	31
							121	51
17	이버멕틴** (Ivermectin)	+	7.86	875.1	874.5	892	5691)	21
							307	35
							551	29
18	메타미도포스 (Methamidophos)	+	1.62	141.1	141.0	142	941)	21
							125	19
							79	29
19	메티다티온 (Methidathion)	+	4.86	302.3	301.9	303	1451)	17
							85	27
							58	39
20	모노크로토포스 (Monocrotophos)	+	3.50	223.2	223.0	224	1271)	21
							58	33
							109	43
21	포레이트 (Phorate)	+	3.89	260.4	260.0	261	751)	15
							97	39
							125	25
22	포레이트 옥손 (Phorate oxon)	+	4.85	244.3	244.0	245	751)	17
							47	41
							41	37
23	포레이트 옥손 설폰 (Phorate oxon sulfone)	+	3.89	276.3	276.0	277	1271)	21
							111	39
							99	35
24	포레이트 옥손 설폭사이드 (Phorate oxon sulfoxide)	+	3.96	260.3	260.0	261	1111)	29
							97	31
							81	67
25	포레이트 설폰 (Phorate sulfone)	+	4.68	292.4	292.0	293	1711)	17
							97	39
							115	33
26	포레이트 설폭사이드 (Phorate sulfoxide)	+	4.65	276.4	276.0	277	1991)	13
							97	41
							143	29
27	피리미포스메틸 (Pirimiphos methyl)	+	5.68	305.3	305.0	306	1641)	29
							108	37
							67	59
28	프로폭서 (Propoxur)	+	4.46	209.3	209.1	210	651)	43
							111	21
							93	29
29	피리다벤 (Pyridaben)	+	6.77	364.9	364.1	365	1471)	33
							309	17
							117	89
30	스피로메시펜 (Spiromesifen)	+	6.25	370.5	370.2	371	2731)	15
							255	33
							187	37
31	설폭사플로르 (Sulfoxaflor)	+	3.94	277.3	277.0	278	1741)	13
							154	39
							105	15
32	테트라코나졸 (Tetraconazole)	+	5.17	372.2	371.0	372	1591)	43
							70	43
33	트리클로르폰 (Trichlorfon)	+	3.89	257.4	255.9	257	1091)	21
							79	43
							83	67

3) 검량선 작성
농도별 표준 용액을 일정량 취하여 무처리 시료 추출 용액과 각각 혼합 한 후 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입한다. 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

4) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램 예시.
* 컬럼 : Imtakt, Cadenza®CD C18(2.0 mm × 50 mm, 3 μm)

5) 정량한계

가)정량한계가 제시되지 않은 농약 검출시 정량분석은 다음을 따른다.

(1) ‘*’ 표시된 농약이 식품에서 검출될 경우 8.3.9 시험법으로 정량한다.

(2) ‘**’ 표시된 농약이 식품에서 검출될 경우 8.3.98 시험법으로 정량한다.

(3) ‘***’ 표시된 농약이 식품에서 검출될 경우 8.3.106 시험법으로 정량한다.

나) 정량이 가능한 농약

분석성분 (Compound)	정량한계(mg/kg)
	가금류고기	알
2,4-디메틸아닐린*** (2,4-Dimethylaniline)	-	-
아바멕틴 (Abamectin)	0.01	0.01
아미트라즈*** (Amitraz)	-	-
카바릴 (Carbaryl)	0.005	0.005
클로티아니딘 (Clothianidin)	0.01	0.01
사이퍼메트린 (Cypermethrin)	0.005	0.005
다이아지논 (Diazinon)	0.005	0.005
디클로르보스** (Dichlorvos)	-	-
에톡사졸 (Etoxazole)	0.005	0.005
페니트로티온 (Fenitrothion)	0.005	0.005
페노뷰카브 (Fenobucarb)	0.005	0.005
펜설포티온 (Fensulfothion)	0.005	0.005
피프로닐 (Fipronil)	0.005	0.01
피프로닐설폰 (Fipronil sulfone)	0.005	0.005
플루페녹수론 (Flufenoxuron)	0.005	0.005
아이소펜포스 (Isofenphos)	0.005	0.005
이버멕틴* (Ivermectin)	-	-
메타미도포스 (Methamidophos)	0.01	0.01
메티다티온 (Methidathion)	0.005	0.005
모노크로토포스 (Monocrotophos)	0.005	0.005
포레이트 (Phorate)	0.005	0.005
포레이트 옥손 (Phorate oxon)	0.005	0.005
포레이트 옥손설폰 (Phorate oxon sulfone)	0.005	0.005
포레이트 옥손 설폭사이드 (Phorate oxon sulfoxide)	0.005	0.005
포레이트 설폰 (Phorate sulfone)	0.005	0.005
포레이트 설폭사이드 (Phorate sulfoxide)	0.005	0.005
피리미포스메틸 (Pirimiphos methyl)	0.005	0.005
프로폭서 (Propoxur)	0.005	0.005
피리다벤 (Pyridaben)	0.005	0.005
스피로메시펜 (Spiromesifen)	0.005	0.005
설폭사플로르 (Sulfoxaflor)	0.01	0.01
테트라코나졸 (Tetraconazole)	0.005	0.005
트리클로르폰 (Trichlorfon)	0.01	0.01

사. 정량시험위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

아. 확인시험액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 특성이온으로 확인한다.