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▶ 제 8. 일반시험법 ▶ 9. 식품 중 유해물질 시험법 ▶ 9.2 곰팡이독소 ▶ 9.2.3 아플라톡신 M1
  • 9.2.3 아플라톡신 M1

    가. 시험법의 적용범위원유, 우유류, 산양유, 조제유류, 영아용 조제식, 성장기용 조제식, 영·유아용 이유식, 영·유아용 특수조제식품

    나. 분석원리검체 중의 아플라톡신 M1을 면역친화성칼럼으로 정제하여 형광검출기가 부착된 액체크로마토그래프로 분석한다.

    다. 장치

    1) 액체그로마토그래프 : 형광검출기(Fluorescence detector)를 사용한다.

    2) 정제용 칼럼 : 아플라톡신 M
    1용 면역친화성칼럼(Immunoaffinity column)

    3) 여과지:Whatman No.4 또는 이와 동등한 것

    4) 시린지필터 : 0.2 μm

    라. 시약 및 시액

    1) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

    2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

    3) 표준원액:아플라톡신 M
    1을 아세토니트릴에 녹여 200 μg/mL되게한다.

    4) 표준용액:표준원액을 아세토니트릴로 희석하여 검량선 작성을 위한 표준용액으로 한다.

    5) 기타시약 : 특급

    마. 시험 용액의 조제

    1) 추출

    가) 액상식품시료 100 mL를 취하여 질량을 측정하고 40℃의 항온수조에 30분간 방치한 후 10분 동안 균질화한다. 균질화한 후 4℃에서 10분 동안 10,000 xG로 원심분리한다. 상층의 지방층을 제거하고 여과한 것을 추출액으로 한다.

    나) 고체식품균질화된 시료 10 g을 정밀히 달아 40℃의 온수 100 mL를 가하고 10분 동안 균질화한다. 균질화한 후 4℃에서 10분 동안 10,000 xG로 원심분리한다. 상층의 지방층을 제거하고 여과한 것을 추출액으로 한다.

    2) 정제
    추출액 50 mL를 정제용 칼럼에 주입하여 초당 1 방울 정도의 속도로 통과시킨다. 이어서 물 20 mL를 같은 유속으로 유출시키고 칼럼내에 남아 있는 용액을 감압펌프를 이용하여 제거한 후 아세토니트릴 4 mL로 용출시킨다. 용출액을 50℃에서 질소로 건고시키고 잔류물에 아세토니트릴․물(25:75, v/v) 0.2 mL를 가하여 녹인 후 시린지필터(0.2 μm)로 여과한 것을 시험용액으로 한다.

    바. 시험조작

    1) 액체크로마토그래프의 측정조건

    가) 칼럼 : C18(4.6 × 250 mm,5 μm) 또는 이와 동등한 것

    나) 이동상 : 아세토니트릴․물(25:75, v/v)

    다) 검출파장 : 여기파장 365 nm 형광파장 435 nm

    라) 유속 : 1 mL/분

    마) 주입량 : 50 μL

    2) 검량선 작성
    표준용액을 액체크로마토그래프에 주입한 후 얻어진 크로마토그램상의 피크 높이 또는 면적을 이용하여 검량선을 작성한다.

    3) 표준품의 크로마토그램

    그림 1. 아플라톡신 M1표준용액의 액체크로마토그램

    사. 정성시험위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

    아. 정량시험정성시험과 동일한 조건에서 얻어진 시험용액의 크로마토그램으로부터 아플라톡신 M1의 피크높이 또는 피크면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

    1) 계산

    아플라톡신 M1의 함량(μg/kg) = C × V/S × D

    C:검량선에서 구한 아플라톡신 M1의 농도(ng)

    V : 시험용액의 최종부피(mL)

    S : 시료 채취량(g)

    D : 희석배수