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▶ 제 8. 일반시험법 ▶ 7. 식품 중 잔류농약 시험법 ▶ 7.1 식품일반 ▶ 7.1.2 다성분 시험법(multiresidue methods) ▶ 7.1.2.3 다성분 시험법-제3법
  • 7.1.2.3 다성분 시험법-제3법

    가. 시험법 적용범위곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

    나. 분석원리시료를 아세토니트릴 또는 아세톤으로 추출한 다음, 기체크로마토그래프 분석농약은 플로리실 및 카본 카트리지로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석하고 액체크로마토그래프 분석농약은 아미노프로필 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

    다. 장치

    1) 기체크로마토그래프 : 전자포획검출기(GC-ECD), 질소․인 검출기(GC-NPD) 또는 불꽃광도검출기(GC-FPD),
    질량분석기(GC-MS 또는 GC-MS/MS)

    2) 액체크로마토그래프:Post-column derivatization system, 형광검출기(
    HPLC-FLD), 자외선흡광검출기(HPLC-UVD), 질량분석기(LC-MS 또는 LC-MS/MS)

    라. 시약 및 시액

    1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

    2) 일회용 카트리지:
    플로리실(Florisil, 1 g), 카본(Carbon, 500 mg) 및 아미노프로필 (Amino-propyl, 1 g) 등의 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지 또는 이와 동등한 것

    3) 표준원액: 각 농약의 표준품을 유기용매에 녹여 표준원액으로 사용한다.

    4) 표준용액: 표준원액을 사용하여 적당한 농도로 혼합, 희석하여 사용한다.

    5) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

    마. 시험용액의 조제

    1) 추출

    가) 아세토니트릴 추출법시료를 정밀히 달아 추출용기에 넣고(곡류 및 두류 등 건조시료의 경우 물 30 mL를 넣어 2시간 방치, 차의 경우 물 40 mL를 넣어 2시간 방치) 아세토니트릴 100 mL를 넣은 후 2~3분간 강하게 흔들어 섞는다. 이를 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 감압 여과한다. 여액을 염화나트륨 10~15 g이 들어있는 500 mL를 분액깔때기에 옮기고 마개를 막은 후 강하게 흔들고 정치하여 층을 분리시킨다. 아세토니트릴층을 무수황산나트륨에 통과시켜 탈수한 후 별도의 아세토니트릴을 넣어 최종 부피가 100 mL가 되게 한다. 아세토니트릴층 20 mL를 각각 취하고 40℃ 이하에서 감압 농축하여 용매를 날려버린다. ★ 잔류물을 기체크로마토그래프 분석 대상 농약의 경우 20% 아세톤 함유 헥산 4 mL로 녹이고, 액체크로마토그래프 분석 대상 농약은 1% 메탄올 함유 디클로로메탄 4 mL로 녹인다.

    나) 아세톤 추출법시료를 정밀히 달아 추출 용기에 넣고(곡류 및 두류 등 건조시료의 경우 물 30 mL를 넣어 2시간 방치, 차의 경우 물 40 mL를 넣어 2시간 방치) 아세톤 100 mL를 넣은 후 2~3분간 강하게 흔들어 섞는다. 이를 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 감압 여과한다. 여과액을 1 L 분액깔때기로 옮기고 포화염화나트륨 용액 50 mL, 물 100 mL 및 디클로로메탄 50 mL를 넣고 마개를 막은 후 강하게 흔들고 정치하여 층을 분리시킨 다음 디클로로메탄층을 취한다. 다시 디클로로메탄 50 mL로 상기의 과정을 되풀이 하여 여액을 합하고 무수황산나트륨에 통과시켜 탈수한 후 별도의 디클로로메탄을 넣어 최종 부피가 100 mL가 되게 한다. 디클로로메탄층 20 mL를 각각 취하고 40℃ 이하에서 감압 농축하여 용매를 날려버린다. ★ 잔류물을 기체크로마토그래프 분석 대상 농약의 경우 20% 아세톤 함유 헥산 4 mL에 녹이고, 액체크로마토그래프 분석 대상 농약은 1% 메탄올 함유 디클로로메탄 4 mL로 녹인다.※ 추출은 상기 가) 또는 나) 중 선택하여 사용함.주1) 용매추출액을 저온에서 정치하면 층분리가 빨라질 수 있음.주2) 곡류, 두류, 견과종실류 등 지방성 시료의 경우 ★까지 시험하고 잔류물에 미리아세토니트릴(또는 메탄올)로 포화시킨 헥산 30 mL를 건고물에 넣어 녹인 후 250 mL 용량의 분액깔때기에 옮기고 미리 헥산으로 포화시킨 아세토니트릴(또는 메탄올) 30 mL씩으로 2회 분배 추출하여 지방을 제거한다. 2회 추출된 아세토니트릴(또는 메탄올)층을 합친 후 40℃에서 감압 농축하고 잔류물을 20% 아세톤 함유 헥산 4 mL(기체크로마토그래프 측정 농약) 및 1% 메탄올 함유 디클로로메탄 4 mL(액체크로마토그래프 측정 농약)에 완전히 녹인다.

    2) 정제

    가) 기체크로마토그래프 측정 농약미리 플로리실 카트리지에 헥산 5 mL를 2~3 방울/초의 속도로 유출시켜 버린다. 이 카트리지에 20% 아세톤 함유 헥산 5 mL를 위와 같은 방법으로 유출시켜 버린다. 이어서 20% 아세톤 함유 헥산 4 mL에 녹인 액을 카트리지 상단에 넣고 1~2 방울/초 정도의 속도로 용출하여 시험관에 받는다. 다시 카트리지가 용매에 젖어 있는 상태에서 20% 아세톤 함유 헥산 5 mL를 용출하여 동일 시험관에 모은다.이를 미리 헥산 5 mL와 20% 아세톤 함유 헥산 5 mL로 활성화시킨 카본 카트리지에 용출액을 넣고1~2 방울/초정도의 속도로 용출시켜 시험관에 받는다. 추가로 20% 아세톤 함유 헥산 15 mL로 용출시켜 동일 시험관에 모은다. 용출액은 40℃ 이하에서 질소 또는 공기를 낮은 유속으로 통과시키면서 용매를 날려 보낸 후 20% 아세톤함유 헥산에 녹여서 일정량으로 한 후 멤브레인 필터(PTFE 0.45 μm)로 여과하여 시험용액으로 한다.(단, 카본 카트리지는 색소 등 방해물질 제거에 필요시에 사용한다.)주3) 정제과정 중에는 모든 카트리지의 충전제가 마르지 않도록 주의한다.주4) 기체크로마토그래프 측정 농약을 전처리할 때 항상 감압농축하기 전에 2% 디에틸글리콜(Diethyl glycol) 함유 아세톤 0.2 mL를 첨가한다.

    나) 액체크로마토그래프 측정 농약미리 아미노프로필 카트리지에 디클로로메탄 5 mL를 2~3 방울/초의 속도로 유출시켜 버린다. 이어서 1% 메탄올 함유 디클로로메탄 4 mL에 녹인 액을 카트리지 상단에 넣고 1~2 방울/초의 속도로 용출시켜 시험관에 받는다. 다시 카트리지가 용매에 젖어 있는 상태에서 1% 메탄올 함유 디클로로메탄 7 mL를 용출하여 동일 시험관에 합친다. 용출액은 40℃ 이하에서 질소 또는 공기를 낮은 유속으로 통과시키면서 용매를 날려 보낸 후 아세토니트릴에 녹여 일정량으로 한 후멤브레인 필터(PTFE 0.2 μm)로 여과하여 시험용액으로 한다.(단, 카본 카트리지는 색소 등 방해물질제거에 필요시에 사용한다.).

    바. 시험조작

    1) 기체크로마토그래프의 분석조건

    가) GC-ECD, GC-NPD

    (1) 컬럼:DB-5(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 및 DB-17(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

    (2) 이동상가스 및 유속:질소(N
    2) 또는 헬륨(He), 1.0 mL/분

    (3) 오븐 온도:80℃에서 시험용액을 주입하고 2분간 유지한 후 7℃/분의 비율로 250℃까지 온도를 상승시키고 5℃/분의 비율로 280℃까지 상승시켜 20분 이상 유지한다.

    (4) 주입부:split mode(20 : 1)

    (5) 검출기 온도:280℃

    나) GC-FPD

    (1) 컬럼:DB-5(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 및 DB-17(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

    (2) 이동상 가스 및 유속:질소(N
    2) 또는 헬륨(He), 1.0 mL/분

    (3) 오븐 온도:80℃에서 시험용액을 주입하고 2분간 유지한 후 7℃/분의 비율로 250℃까지 온도를 상승시키고 5℃/분의 비율로 280℃까지 상승시켜 20분 이상 유지한다.

    (4) 주입부:splitless mode

    (5) 검출기 온도:280℃

    2) 기체크로마토그래프 분석 대상(206 성분)

    1

    Acrinathrin(ECD)

    2

    Aldrin(ECD)

    3

    Ametryn(NPD)

    4

    Anilofos(NPD,ECD)

    5

    Atrazine(NPD)

    6

    Azaconazole(NPD)

    7

    Azinphos-ethyl(FPD)

    8

    Azinphos-methyl(ECD,NPD)*

    9

    α-BHC(ECD)

    10

    β-BHC(ECD)

    11

    γ-BHC(ECD)

    12

    δ-BHC(ECD)

    13

    Bifenthrin(ECD)

    14

    Binapacryl(ECD)

    15

    Bromacil(ECD)

    16

    Bromobutide(NPD)

    17

    Bromophos-methyl(FPD)

    18

    Bromopropylate(ECD)

    19

    Bromoxynil(ECD)

    20

    Bupirimate(NPD)

    21

    Butafenacil(ECD)

    22

    Cadusafos(NPD,FPD)

    23

    Captafol(ECD)*

    24

    Captan(ECD)*

    25

    Carbophenothion(ECD,NPD)

    26

    Chinomethionat(ECD,NPD)

    27

    Chlordane(ECD)

    28

    Chlorfenapyr(NPD,FPD)

    29

    Chloridazon(ECD)

    30

    Chlorobenzilate(ECD)

    31

    Chlorothalonil(ECD)

    32

    Chlorpyrifos(ECD,NPD)

    33

    Chlorpyrifos-methyl(ECD,NPD)

    34

    Chlorthal-dimethyl(ECD)

    35

    Clomeprop(ECD)

    36

    Cyanazine(ECD)

    37

    Cyanophos(NPD)

    38

    Cyflufenamid(ECD)*

    39

    Cyfluthrin(ECD)*

    40

    Cyhalothrin(ECD)*

    41

    Cypermethrin(ECD)*

    42

    Cyproconazole(NPD)

    43

    Cyprodinil(NPD)*

    44

    p,p-DDD(ECD)

    45

    p,p-DDE(ECD)

    46

    o,p-DDT(ECD)

    47

    p,p-DDT(ECD)

    48

    Deltamethrin(ECD)*

    49

    Diazinon(ECD,NPD)

    50

    Dichlofluanid(ECD,NPD)***

    51

    Dichlorvos(NPD,FPD)*

    52

    Dicloran(ECD)

    53

    Dicofol(ECD)

    54

    Dieldrin(ECD)*

    55

    Diethofencarb(NPD)

    56

    Diflufenican(ECD)

    57

    Dimepiperate(ECD,NPD,FPD)

    58

    Dimethachlor(ECD)

    59

    Dimethenamid(NPD,ECD)

    60

    Dimethoate(ECD,NPD)

    61

    Dimethylvinphos(NPD,FPD,ECD)

    62

    Diniconazole(ECD)

    63

    Diphenamid(NPD)

    64

    Diphenylamine(NPD)

    65

    Dithiopyr(ECD)

    66

    Edifenphos(ECD,NPD)

    67

    α-Endosulfan(ECD)

    68

    β-Endosulfan(ECD)

    69

    Endosulfan-sulfate(ECD)

    70

    Endrin(ECD)

    71

    EPN(ECD, NPD)

    72

    Esprocarb(ECD,NPD)

    73

    Ethion(ECD,NPD)

    74

    Ethoprophos(ECD,NPD)

    75

    Etoxazole(NPD)

    76

    Etrimfos(ECD,NPD)

    77

    Fenamidone(ECD,NPD)

    78

    Fenarimol(ECD,NPD)*

    79

    Fenazaquin(NPD,FPD)*

    80

    Fenbuconazole(ECD,NPD)*

    81

    Fenitrothion(ECD,NPD)

    82

    Fenobucarb(NPD)

    83

    Fenothiocarb(NPD)*

    84

    Fenoxanil(ECD,NPD)

    85

    Fenoxycarb(NPD)

    86

    Fenpropathrin(ECD,NPD)**

    87

    Fenthion(ECD,NPD)*

    88

    Fenvalerate(ECD)*

    89

    Fipronil(NPD,FPD,ECD)

    90

    Flonicamid(ECD)*

    91

    Fluacrypyrim(ECD)

    92

    Fludioxonil(NPD)

    93

    Flufenacet(ECD)

    94

    Flufenoxuron(NPD)

    95

    Flumiclorac-pentyl(ECD)

    96

    Fluquinconazole(ECD)

    97

    Flusilazole(NPD)

    98

    Fluthiacet-methyl(ECD)

    99

    Flutolanil(ECD,NPD)

    100

    Fluvalinate(ECD)*

    101

    Folpet(ECD)*

    102

    Fonofos(NPD)

    103

    Fosthiazate(NPD,FPD)

    104

    Fthalide(ECD)

    105

    Furathiocarb(NPD)

    106

    Heptachlor(ECD)

    107

    Heptachlor epoxide(ECD)

    108

    Hexachlorobenzene(ECD)

    109

    Hexaflumuron(ECD)

    110

    Imazalil(ECD)*

    111

    Imibenconazole(NPD)

    112

    Indanofan(ECD)

    113

    Indoxacarb(ECD)

    114

    Iprobenfos(NPD,FPD)

    115

    Iprodione(ECD)

    116

    Iprovalicarb(ECD)

    117

    Isofenphos(NPD)

    118

    Isofenphos-methyl(NPD)*

    119

    Isoprothiolane(ECD)

    120

    Isoxathion(NPD)

    121

    Kresoxim-methyl(NPD)

    122

    Lactofen(ECD)

    123

    Lufenuron(ECD)

    124

    Malathion(ECD,NPD)

    125

    Mecarbam(ECD,NPD)

    126

    Mefenacet(ECD)

    127

    Mefenpyr-diethyl(ECD)

    128

    Mepronil(NPD)

    129

    Metconazole(NPD)

    130

    Methabenzthiazuron(NPD)

    131

    Methidathion(ECD,NPD)

    132

    Methoxychlor(ECD)

    133

    Metrafenone(ECD)

    134

    Molinate(NPD)

    135

    Myclobutanil(ECD,NPD)*

    136

    Nitrapyrin(ECD)

    137

    Nitrothal-isopropyl(ECD)

    138

    Nonachlor(ECD)

    139

    Novaluron(ECD)

    140

    Nuarimol(ECD)*

    141

    Ofurace(ECD)

    142

    Oxadixyl(ECD,NPD)

    143

    Oxydemeton-methyl(FPD)

    144

    Paclobutrazol(ECD,NPD)*

    145

    Parathion(ECD,NPD)

    146

    Parathion-methyl(ECD,NPD)

    147

    Penconazole(ECD,NPD)

    148

    Pencycuron(NPD)

    149

    Pendimethalin(ECD,NPD)

    150

    Permethrin(ECD)**

    151

    Phenthoate(ECD,NPD)

    152

    Phosalone(ECD,NPD)

    153

    Phosmet(ECD,NPD)

    154

    Phosphamidone(ECD,NPD)

    155

    Picolinafen(ECD)

    156

    Picoxystrobin(ECD)

    157

    Piperophos(NPD,FPD)

    158

    Pirimicarb(NPD)

    159

    Pirimiphos-ethyl(NPD)

    160

    Pirimiphos-methyl(NPD)

    161

    Probenazole(ECD)

    162

    Prochloraz(ECD)

    163

    Procymidone(ECD,NPD)

    164

    Profenofos(ECD,NPD)

    165

    Propazine(NPD)

    166

    Propisochlor(ECD,NPD)

    167

    Propoxur(NPD)

    168

    Propyzamide(ECD)

    169

    Prothiofos(NPD)

    170

    Pyraclofos(NPD)

    171

    Pyrazophos(ECD,NPD)

    172

    Pyridaben(NPD,ECD)*

    173

    Pyridalyl(ECD,NPD,FPD)

    174

    Pyrimethanil(NPD)

    175

    Pyrimidifen(ECD)

    176

    Pyriminobac-methyl(NPD)

    177

    Quinalphos(NPD)

    178

    Quintozene(ECD)

    179

    Simeconazole(NPD)

    180

    Sulprofos(FPD)

    181

    TCMTB(ECD)

    182

    Tebuconazole(NPD)*

    183

    Tebufenpyrad(NPD)*

    184

    Tebupirimfos(ECD,NPD, FPD)

    185

    Teflubenzuron(ECD)

    186

    Tefluthrin(ECD)

    187

    Terbufos(NPD)*

    188

    Terbutylazine(ECD,NPD)

    189

    Tetrachlorvinphos(FPD)

    190

    Tetradifon(ECD)

    191

    Thiazopyr(ECD,NPD)

    192

    Thifluzamide(ECD,NPD)

    193

    Thiometon(ECD,NPD)

    194

    Tolclofos-methyl(ECD,NPD)

    195

    Tolfenpyrad(NPD)

    196

    Tolylfluanid(ECD,NPD)

    197

    Tralomethrin(ECD,NPD)

    198

    Triadimefon(ECD,NPD)

    199

    Triazophos(NPD)

    200

    Tribufos(FPD)

    201

    Triflumizole(ECD,NPD)

    202

    Triflumuron(ECD)

    203

    Uniconazole(ECD)

    204

    Vernolate(ECD)

    205

    Vinclozoline(ECD,NPD)

    206

    Zoxamide(ECD,NPD)

    3) 액체크로마토그래프의 분석조건

    가) HPLC-FLD(Post-derivatization 포함)

    (1) 컬럼:C
    18(3.9 mm × 150 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

    (2) 검출파장:Excitation 340 nm, Emission 455 nm

    (3) 이동상:물과 메탄올

    - 메탄올:물(3:7)의 혼합액에서 메탄올:물(7:3)의 혼합액으로 23분간 농도균배한 후 5분 이상 흘려보낸다.

    (4) 이동상 유속:0.8 mL/분

    (5) Post Reaction Pump 유속:0.5 mL/분(NaOH 0.25 mL/분, OPA 0.25 mL/분) 또는 기타 최적조건

    나) HPLC-UVD

    (1) 컬럼:C
    18(4.6 mm × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 등등한 것

    (2) 검출파장:254 nm

    (3) 이동상:물과 아세토니트릴

    - 아세토니트릴:물 혼합액(20 : 80)에서 (80 : 20)의 혼합액으로 40분간 농도균배한 후 10분 이상 흘려보낸다.

    -메탄올:물(35 : 65)에서 (90 : 10)의 혼합액으로 40분간 농도균배한 후 10분 이상 흘려보낸다.※ 이동상의 조건은 상기 두 가지 중 선택하여 사용함

    (4) 이동상 유속:1.0 mL/분

    4)

    1

    Acetamiprid(UVD)*

    2

    Aldicarb(FLD)

    3

    Amisulbrom(UVD)

    4

    Azoxystrobin(UVD)

    5

    Bendiocarb(FLD)

    6

    Benzoximate(UVD)*

    7

    Boscalid(UVD)

    8

    Bromoxynil(UVD)

    9

    Butocarboxim(FLD)

    10

    Carbaryl(FLD)

    11

    Carbofuran(FLD)

    12

    Chlorantraniliprole(UVD)

    13

    Chlorimuron-ethyl(UVD)

    14

    Chlorobenzuron(UVD)

    15

    Chlorotoluron(UVD)

    16

    Chromafenozide(UVD)

    17

    Cinosulfuron(UVD)

    18

    Clothianidin(UVD)*

    19

    Cyazofamid(UVD)

    20

    Cymoxanil(UVD)

    21

    Dimethomorph(UVD)

    22

    Ethaboxam(UVD)

    23

    Ethametsulfuron-methyl(UVD)

    24

    Ethiofencarb(FLD)

    25

    Fenhexamid(UVD)

    26

    Fenpyroximate(UVD)*

    27

    Ferimzone(UVD)

    28

    Fluacrypyrim(UVD)

    29

    Flubendiamide(UVD)

    30

    Flufenacet(UVD)

    31

    Flufenoxuron(UVD)

    32

    Fluquinconazole(UVD)

    33

    Flusulfamide(UVD)

    34

    Forchlorfenuron(UVD)

    35

    Hexaflumuron(UVD)

    36

    Imazamox(UVD)

    37

    Imazapic(UVD)

    38

    Imazaquin(UVD)

    39

    Imazethapyr(UVD)

    40

    Imibenconazole(UVD)

    41

    Iprovalicarb(UVD)

    42

    Isoprocarb(FLD)

    43

    Isoproturon(UVD)

    44

    Lufenuron(UVD)

    45

    Mepanipyrim(NPD, UVD)

    46

    Metamifop(UVD)

    47

    Methabenzthiazuron(UVD)

    48

    Methiocarb(FLD)

    49

    Methomyl(FLD)*

    50

    Methoxyfenozide(UVD)

    51

    Metolcarb(FLD)

    52

    Nitenpyram(UVD)

    53

    Novaluron(UVD)

    54

    Oxamyl(FLD)*

    55

    Oxaziclomefon(UVD)

    56

    Phenmedipham(UVD)

    57

    Pirimicarb(FLD)

    58

    Promecarb(FLD)

    59

    Propoxur(FLD)

    60

    Pyraclostrobin(UVD)

    61

    Pyrazolate(UVD)

    62

    Pyribenzoxim(UVD)

    63

    Pyributicarb(UVD)

    64

    Pyridate(UVD)

    65

    Pyrimethanil(UVD)

    66

    Pyriproxyfen(UVD)

    67

    Pyroquilon(UVD)

    68

    Quinoclamine(UVD)

    69

    Rimsulfuron(UVD)

    70

    Spirodiclofen(UVD)

    71

    Tebufenozide(UVD)

    72

    Teflubenzuron(UVD)

    73

    Thenychlor(UVD)

    74

    Thiacloprid(UVD)*

    75

    Thiamethoxam(UVD)*

    76

    Thiodicarb(FLD)

    77

    Tiadinil(UVD)

    78

    Tribenuron-methyl(UVD)

    79

    Tricyclazole(NPD, UVD)

    80

    Trifloxystrobin(ECD, UVD)

    81

    2,3,5-Trimethacarb(FLD)

    82

    3,4,5-Trimethacarb(FLD)

    액체크로마토그래프 분석 대상(82 성분)

    사. 정성시험위의 조건에서 시험할 때 시험결과는 어느 분석조건에서도 표준품과 일치하여야 한다.GC-MS(MS/MS 포함) 및 LC-MS(MS/MS 포함)상의 머무름시간(retention time) 및 질량분석 스펙트럼으로 각 농약의 성분을 확인할 수 있다.

    아. 정량시험

    1) 정량시험은 단일 표준품으로 표준용액을 일정농도로 제조한 후 검량선을 작성하여 위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

    2) ‘바. 시험조작’의 분석대상 농약 중 * 표시된 농약의 정량시험은 다음을 따른다.

    가) ‘*’ 표시된 농약이 식품에서 검출될 경우7.1.2.2, 7.1.2.4, 7.1.2.16, 7.1.2.20 시험법으로 정량한다.

    나) ‘**’ 표시된 농약(Fenpropathrin, Permethrin)이 검출될 경우 7.1.2.4 시험법으로 정량한다.

    다) ‘***’ 표시된 농약Dichlofluanid가 검출된 경우7.1.3.1 시험법으로 정량한다.