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▶ 제 8. 일반시험법 ▶ 7. 식품 중 잔류농약 시험법 ▶ 7.1 식품일반 ▶ 7.1.2 다성분 시험법(multiresidue methods) ▶ 7.1.2.22 사이할로프뷰틸(Cyhalofop-butyl), 피리데이트(Pyridate), 퀴잘로포프에틸(Quizalofop-ethyl)
  • 7.1.2.22 사이할로프뷰틸(Cyhalofop-butyl), 피리데이트(Pyridate), 퀴잘로포프에틸(Quizalofop-ethyl)

    가. 시험법 적용범위곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등의 식품에 적용한다.

    나. 분석원리시료를 아세토니트릴로 추출한 후 d-SPE(dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

    다. 장치

    1) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

    라. 시약 및 시액

    1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

    2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

    3)표준원액 : 사이할로포프뷰틸, 피리데이트, 퀴잘로포프에틸 표준품을 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

    4) 표준용액 : 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

    5) d-SPE : Z-Sep(Zirconium dioxide-based sorbent)

    6)기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

    마. 시험용액의 조제

    1) 추출
    시료를 10 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고 아세토니트릴 20 mL를 넣고(곡류 및 두류의 경우 5 g을 정밀히 달아 물 5 mL를 넣고 30분간 방치한 후 아세토니트릴 10 mL 넣음) 1분간 강하게 흔들어 섞고 무수황산마그네슘 4 g, 염화나트륨 1 g, 구연산이나트륨․1.5 수화물 0.5 g, 구연산삼나트륨․2수화물 1 g을 넣고 1분간 강하게 흔든 후 4℃, 4,000 G에서 5분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다.

    2) 정제
    Z-Sep 75 mg이 담겨 있는 2 mL 원심분리관에 ‘1) 추출’에서 얻은 상층액 1.5 mL를 넣고 1분간 강하게 흔들어 섞은 다음 이를 원심분리 등의 방법으로 층을 분리한다. 상층액과 메탄올을 1 : 1로 혼합하고 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과한 후 시험용액으로 한다.

    바. 시험조작

    1) 액체크로마토그래프 분석조건

    가) 컬럼 :C18계 역상 컬럼 또는 이와 동등한 것

    나) 컬럼 온도 : 40℃

    다) 이동상

    (1) 이동상 A : 0.1% 포름산 및 5 mM 포름산암모늄 함유 메탄올

    (2) 이동상 B : 0.1% 포름산 및 5 mM 포름산암모늄 함유 물

    (3) 농도구배조건

    시간(분)

    A(%)

    B(%)

    0.0

    5

    95

    2.0

    5

    95

    4.0

    95

    5

    10.0

    95

    5

    12.0

    5

    95

    15.0

    5

    95

    라) 이동상 유속 : 0.3 mL/분

    마) 주입량 : 5 μL

    2) 질량분석기 분석조건

    가) 이온화 방법 : ESI positive-ion mode

    나) Capillary voltage : 3.9 kV

    다) Collision gas : 아르곤(Ar)

    분석성분

    (Compound)

    분자량

    (MW)

    관측질량

    (Exact mass)

    선구이온

    (Precursor

    ion, m/z)

    생성이온(Product ion, m/z)

    충돌에너지

    (Collision energy, eV)

    사이할로포프뷰틸

    (Cyhalofop-butyl)

    357.4

    357.1

    358

    2561)

    10

    120

    26

    피리데이트

    (Pyridate)

    378.9

    378.1

    379

    2071)

    28

    351

    10

    퀴잘로포프에틸

    (Quizalofop-ethyl)

    372.8

    372.0

    373

    2991)

    20

    91

    32

    라)액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

    1)정량이온

    3) 검량선 작성
    표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

    4) 표준품의 크로마토그램

    그림 1. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램 예시.

    1. 사이할로포프뷰틸(9.6분), 2. 퀴잘로포프에틸(10.3분), 3. 피리데이트(12.8분)

    *분석기기 : LC(WatersⓇAlience 2695 LC separation module), MS/MS(WatersⓇMicromass Quattro Micro triple quadrupole tandem mass),

    컬럼(AgilentⓇZORBAX Eclipse Plus C18, 3.0 mm × 150 mm, 3.5 μm)

    5) 정량한계
    0.01 mg/kg

    사. 정량시험위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

    아. 확인시험액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 특성이온으로 사이할로포프뷰틸, 피리데이트, 퀴잘로포프에틸을 확인한다.