8.3.3나라신(Narasin), 라살로시드(Lasalocid), 마두라마이신(Maduramycin), 모넨신(Monensin), 살리노마이신(Salinomycin), 샘두라마이신(Semduramicin)

1) 시험법 적용범위

축·수산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

시료중 분석대상물질을 아세토니트릴로 추출하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매:액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물: 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액: 각 표준품을 100 mL 메탄올로조제한 용액을 표준원액으로 한다.조제된 표준원액은 냉동 보관한다.

라) 혼합표준용액:각각의 표준원액을 잔류허용기준 또는 검출에 적합한 농도가 되도록 물로 희석하여 사용한다.

마) 0.2 M 인산완충용액(pH 7.2): 500 mL 용량플라스크에 제이인산나트륨(Na2HPO4․H2O) 5.11 g과 제일인산나트륨(NaH2PO4․H2O) 1.68 g을 달아물로녹여 표시선까지 채운다.

바) 0.3%포름산(formic acid)수용액: 1,000 mL 용량플라스크에포름산3 mL를 넣고물로표시선까지 채운다.

사) 0.3%포름산함유 아세토니트릴: 1,000 mL 용량플라스크에포름산3 mL를 넣고 아세토니트릴로 표시선까지 채운다.

아) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화한시료1 g을 50 mL 원심분리관에 취하고 0.2 M 인산완충액 (pH 7.2) 1 mL를넣고 흔들어 섞어 추출한 후아세토니트릴 10 mL를 넣고 5분간흔들어 섞는다. 4℃에서 3,500G로 20분간 원심분리하여 상층액을 취한 후40℃ 이하에서질소농축한다. 잔류물에 50% 아세토니트릴 용액 1 mL를넣어녹인 후0.2μmPTFE(polytetrafluoroethylene)멤브레인필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 컬럼: C8(2.1 mm×100 mm, 3.5 μm)또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A: 0.3%포름산수용액

(나) 이동상 B: 0.3%포름산함유 아세토니트릴

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0.0	50	50
10.0	10	90
14.0	10	90
15.0	0	100
25.0	0	100
25.5	50	50
30.0	50	50

(3) 유속: 0.25 mL/분

(4)컬럼온도: 35℃

(5) 주입량: 10 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization mode: ESI(positive)

(2) Source temperature: 350℃

(3) Capillary voltage: 4.0 kV

(4) Collision gas: N2(질소)

연번	물질명 (Compound)	머무름 시간 (분)	이온화 (Ionizationmode)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursorion,m/z)	생성이온 (Product ion,m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
1	나라신 (Narasin)	14.11	Positive	764.5	787.5	431.3	60
						531.3	50
						413.1	60
2	라살로시드-Na (Lasalocid-Na)	11.71	Positive	612.4	613.2	377.1	40
						577.1	30
						595.3	30
3	마두라마이신 (Maduramycin)	15.02	Positive	916.5	939.4	877.4	30
						895.2	50
						859.0	50
4	모넨신-Na (Monensin-Na)	13.15	Positive	692.4	693.3	461.2	60
						479.2	60
						501.2	60
5	살리노마이신-Na (Salinomycin-Na)	12.92	Positive	772.5	773.3	431.2	60
						531.2	50
						265.2	60
6	샘두라마이신 (Semduramicin)	10.75	Positive	872.5	895.3	833.4	30
						851.2	30
						815.1	30

(5) 분석대상물질의 개별조건

※ 밑줄 표시되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

7) 정성시험

가) 정성 및 확인

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(precursor ion) 및 생성이온(product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(ion ratio)을 비교하여 그 비율은 주1)과 일치하여야 한다.
확인시험의 경우, 음성시료 (blank sample)에 해당 물질을 넣은 것을 시료와 동일하게 전처리하여 얻은 표준용액으로서 비교한다.

주1)생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율 (Base peak에 대한 %)	허용범위
> 50%	± 20%
> 20%, ≤ 50%	± 25%
> 10%, ≤ 20%	± 30%

나라신	라살로시드
마두라마이신	모넨신
살리노마이신	샘두라마이신

나) 표준품 크로마토그램

그림 1.나라신(14.1분), 라살로시드(11.7분), 마두라마이신(15.0분), 모넨신(13.1분), 살리노마이신(12.9분), 샘두라마이신(10.7분)표준품의 크로마토그램(각 0.4 mg/L)

8)정량시험

가) 정량

조직표준곡선(tissue standard curve) 작성을 위하여 각 해당 물질이 검출되지 않은 음성시료(blank sample) 1 g씩 준비한 후 음성시료(blank sample)를 포함하여 5개 이상의 농도로 전처리하여 표준용액을 제조한다. 각 농도별 첨가시료에서 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는면적을 구하여 검량선을 작성한 후, 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 산출된 시험용액 중 검출농도,시료량과 최종 시험용액의 부피를 고려하여 정량한다.

나) 정량한계

동물용의약품	정량한계(mg/kg)
	식육	유(乳)	알(卵)	수산물
나라신 (Narasin)	0.01	0.002	0.003	0.002
라살로시드 (Lasalocid)	0.005	0.001	0.01	0.001
마두라마이신 (Maduramycin)	0.004	0.002	0.002	0.002
모넨신 (Monensin)	0.009	0.002	0.004	0.002
살리노마이신 (Salinomycin)	0.008	0.001	0.005	0.002
샘두라마이신 (Semduramicin)	0.005	0.002	0.003	0.002