락타아제

Lactase

β-Galactosidase

β-갈락토시다아제

 

정    의  이 품목은 Aspergillus niger 및 그 변종, Aspergillus oryzae 및 그 변종, Bacillus circulans, Saccharomyces속의 배양물, Bifidobacterium bifidum의 락타아제 유전자를 삽입한 Bacillus licheniformis의 배양물에서 얻어진 효소제이다. 다만, 역가조정, 품질보존 등을 위하여 희석제, 안정제 등을 첨가할 수 있다.

  이 품목은 젖당을 가수분해하여 포도당과 갈락토오스를 생성한다.

성    상  이 품목은 백～진한 갈색의 분말, 입상, 페이스트상 또는 무～진한 갈색의 액상이다.

확인시험  이 품목의 활성시험법에 따라 시험할 때 활성을 나타내어야 한다.

순도시험  (1) 비소 : 이 품목을 비소시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 4.0ppm 이하이어야 한다.

  (2) 납 : 이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 5.0ppm 이하이어야 한다.

  (3) 대장균군 : 이 품목은 「식품의 기준 및 규격」 일반시험법의 미생물시험법 중 대장균군에 따라 시험할 때, 제품 1g당 30 이하이어야 한다.

  (4) 살모넬라 : 이 품목은 「식품의 기준 및 규격」 일반시험법의 미생물시험법 중 살모넬라균시험법에 따라 시험할 때, 음성(—)이어야 한다.

  (5) 대장균 : 이 품목은 「식품의 기준 및 규격」일반시험법의 미생물시험법 중 대장균에 따라 시험할 때, 음성(-)이어야 한다.

활성시험법(역가)

  분석원리 : 본 역가시험은 pH(Aspergillus niger 및 그 변종과 Aspergillus oryzae 및 그 변종은 4.5, Bacillus circulans는 6.0, Saccharomyces속은 6.5, 온도 37℃)에서 ο-Nitrophenyl-β-D-Galactopyranoside(ONPG) 기질의 15분간 가수분해에 근거를 두고 있다.

  시험용액의 조제 : 최종희석액 1mL가 0.15～0.65 Lactase unit를 함유하도록 시험용액을 조제한다. 검체를 정밀히 달아 유발에 취하고 각각의 알맞은 완충액을 가하여 분쇄시킨 다음 이를 일정량의 메스플라스크에 옮겨 각각에 알맞은 완충액으로 채운다.

  시험조작 : 20×150mm 마개 있는 시험관 몇 개를 일조로 하여 해당기질용액 4mL씩을 취하여 넣고 37±0.1℃의 수욕조에 유지하여 온도를 평형 시킨다. 시험용액 1mL를 정확히 취하여 가하고 흔들어 혼합한다. 정확히 15분후 이들 혼합액 중 각 1mL를 10% 탄산나트륨용액 1mL가 든 시험관에 취하고 흔든 다음 물을 가하여 10mL로 한다. 따로, 시험용액 대신 물 1mL를 사용하여 시험용액과 같이 처리한 것을 대조액으로 하여 액층 1cm, 파장 420nm에서 흡광도를 측정한다.

    다음 계산식에 따라 효소제의 역가를 구한다.

 

역가(LACU/g) ＝	A × 5 × 10
	ε × 15 × W

 

A : 시험용액에 대한 평균흡광도

5  : 효소반응혼합액의 양(mL)

10 : 희석된 효소반응혼합액의 최종량(mL)

 ε : 표준 ο-니트로페놀용액에 따라 측정된 흡광계수

15 : 항온시간(분)

W : 시험용액 1mL에 함유된 검체의 양(g)

  역가의 정의 : 1 Lactase unit(LACU)는 상기시험조건 하에서 분당 1μmol의 ο-니트로페놀을 유리시키는 효소의 양이다.

  시   액

    초산염완충액(Aspergillus niger 및 그 변종, Aspergillus oryzae 및 그 변종용) : 2N 초산 50mL를 물 약 800mL에 가하고 2N 수산화나트륨용액으로 pH 4.5±0.05로 조절(단, Bacillus circulans인 경우는 pH 6.0±0.05로 조절)한 다음 물을 가하여 1,000mL로 한다.

    P-E-M완충액(Saccharomyces속용) : 인산일칼륨 27.2g, 이.디.티.에이.이나트륨(2수화물) 37.2mg 및 염화마그네슘(MgCl₂·6H₂O) 20.3mg을 물 800mL에 녹이고 2N 수산화나트륨용액을 가하여 pH 6.5±0.05로 조절한 다음 물을 가하여 전량을 1,000mL로 한다.

    표준 ο-니트로페놀용액 : ο-니트로페놀(ο-Nitrophenol) 139.0mg을 1,000mL 메스플라스크에 취하고 95% 에탄올 10mL를 가하여 녹인 다음 물을 가하여 1,000mL로 한다. 이 용액 2, 4, 6, 8, 10, 12 및 14mL를 100mL 메스플라스크에 각각 취하여 1% 탄산수소나트륨용액으로 채운다. 이들 희석액은 1mL당 ο-니트로페놀 0.02, 0.04, 0.06, 0.08, 0.10, 0.12 및 0.14μmol을 함유한다. 이들 용액에 대해 물을 대조액으로 하여 액층 1cm, 파장 420nm에서 흡광도를 각각 측정하고 ο-니트로페놀 μmol수에 대한 검량선에 작성한다. 검량선은 0점을 통과하는 일직선이어야 한다. 각 희석액 흡광도를 ο-니트로페놀 μmol/mL수로 나누어 희석액에 대한 흡광계수(Extinction coefficient)(ε)를 구한다. 그 값은 4.65 근사치가 얻어져야 한다.

    Aspergillus 및 Bacillus 기질용액 : ο-니트로페닐-β-D-갈락토피라노시드(ο-Nitrophenyl-β-D-galactopyranoside) 370mg을 100mL 메스플라스크에 취하여 초산염완충액 약 75mL에 녹인 후 전량을 100mL로 한다.

    Saccharomyces 기질용액 : ο-니트로페닐-β-D-갈락토피라노시드(ο-Nitrophenyl-β-D-galactopyranoside) 250mg을 취하여 100mL의 메스플라스크에 취하여 P-E-M

     완충액 약 75mL에 녹인 후 전량을 100mL로 한다.

보존기준

  냉암소에서 밀봉 보존하여야 한다.