α-글루코시다아제

α-Glucosidase

 

정    의  이 품목은 Aspergillus niger의 배양물에서 얻어진 효소제이다. 다만, 역가조정, 품질보존 등을 위하여 희석제, 안정제 등을 첨가할 수 있다.

  이 품목은 맥아당이나 올리고당의 α-D-글루코시드 결합을 절단함과 동시에 전이반응으로서 비발효성 당을 생성한다.

성    상  이 품목은 백～진한 갈색의 분말, 입상, 페이스트상 또는 무～진한 갈색의 액상이다.

확인시험  이 품목의 활성시험법에 따라 시험할 때 활성을 나타내어야 한다.

순도시험  (1) 비소 : 이 품목을 비소시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 4.0ppm 이하이어야 한다.

  (2) 납 : 이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 5.0ppm 이하이어야 한다.

  (3) 대장균군 : 이 품목은 「식품의 기준 및 규격」 일반시험법의 미생물시험법 중 대장균군에 따라 시험할 때, 제품 1g당 30 이하이어야 한다.

  (4) 살모넬라 : 이 품목은 「식품의 기준 및 규격」 일반시험법의 미생물시험법 중 살모넬라에 따라 시험할 때, 음성(-)이어야 한다.

  (5) 대장균 : 이 품목 25g을 취하여 「식품의 기준 및 규격」 일반시험법의 미생물시험법 중 대장균에 따라 시험할 때, 음성(-)이어야 한다.

활성시험법(역가)

분석원리 : 본 역가시험은 온도 40℃에서 4-니트로페닐-α-D-글루코피라노시드(4-Nitrophenyl-α-D-glucopyranoside) 기질에 α-글루코시다아제를 작용시켜 생성된 p-니트로페놀의 흡광도를 측정하는데 근거를 두고 있다.

  시험용액의 조제 : 검체 일정량을 취하여 1N 초산․초산나트륨완충액희석액(1N 초산․초산나트륨완충액(pH 5.0) 10mL에 물을 가하여 1,000mL로 한 액)을 사용하여 최종 희석액 0.5mL가 다음의 시험방법에 따라 시험할 때 흡광도가 0.25～0.95의 범위가 되도록 시험용액을 조제한다. 이 액은 사용 시 조제한다.

 시험조작 : 기질용액 2mL를 취하여 시험관에 넣고 40±0.5℃에서 5분간 방치하고 이에 시험용액 0.5mL를 가하여 혼합한 다음 40±0.5℃에서 정확하게 10분간 항온시킨다. 이 액에 10% 탄산나트륨용액 0.5mL를 가하여 혼합하고 얼음수욕조에서 5분간 냉각시키고 흡광도를 측정할 때까지 흐르는 물에 방치한 후 물을 대조액으로 하여 파장 420nm에서 흡광도(A₁)를 측정한다. 따로, 효소공시험용으로 시험용액 0.5mL를 취하여 시험관에 넣고 10% 탄산나트륨용액 0.5mL를 가하여 혼합한 다음 기질용액 2mL를 가하여 혼합하고 얼음수욕조에서 5분간 냉각시키고 흡광도를 측정할 때까지 흐르는 물에 방치한 후 물을 대조액으로 하여 파장 420nm에서 효소공시험용액의 흡광도(A₂)를 측정한다.

      다음 계산식에 따라 효소제의 역가를 구한다.

 

역가(units/g) =	(A1-A2)	×	F	×	3	×	1	×	1
					0.5		10		W

 

  A₁ : 효소반응액의 흡광도

  A₂ : 효소공시험용액의 흡광도

  F  : 검량선에서 흡광도차가 1.0인 경우 p-니트로페놀의 양

10 :  반응시간(분)

  W : 시험용액 1mL에 함유된 검체의 양(g)     

  검량선의 작성 : p-니트로페놀 0.1391g을 p-니트로페놀희석액에 용해시키고 p-니트로페놀희석액을 가하여 500mL로 한다. 이 액 0.5mL, 1mL, 1.5mL, 2mL 및 2.5mL를 취하여 p-니트로페놀희석액을 가하여 각각 100mL로 한 액을 각 표준용액으로 한다. 각 액 1mL는 0.01, 0.02, 0.03, 0.04 및 0.05 μmol/mL의 p-니트로페놀을 함유한다. 각 표준용액을 물을 대조액으로 하여 파장 420nm에서 흡광도를 측정한다. X축에는 p-니트로페놀 농도(μmol/mL), Y축에는 흡광도로 하여 효소역가의 검량선을 작성한다.

  역가의 정의 : 1 α-Glucosidase unit는 상기시험조건 하에서 기질로부터 1분간에 1μmol의 p-니트로페놀을 유리시키는 효소의 양이다.

시  액

    기질용액 : 4-니트로페닐-α-D-글루코피라노시드(4-Nitrophenyl-α-D-glucopyranoside) 0.113g에 물 35mL를 가하여 녹인 다음 이에 1N 초산․초산나트륨완충액(pH 5.0) 5mL를 가해주고 물을 가하여 50mL로 한다. 이 액은 사용시 조제한다.

    1N 초산․초산나트륨완충액(pH 5.0) : 1N 초산나트륨용액 600mL를 1N 초산 300mL와 혼합한 다음 1N 초산으로 pH 5.0으로 조절한다.

    p-니트로페놀희석액 : 1N 초산․초산나트륨완충액(pH 5.0) 82mL에 물을 가하여 1,000mL로 하고, 이에 10% 탄산나트륨용액 200mL를 가해준다. 이 액은 사용시 조제한다.

보존기준

  냉암소에서 밀봉 보존하여야 한다.