top
▶ 제 8. 일반시험법 ▶ 8. 식품 중 잔류동물용의약품시험법 ▶ 8.3 정량시험법 ▶ 8.3.78 페노뷰카브(Fenobucarb)
  • 8.3.78 페노뷰카브(Fenobucarb)

    1) 시험법 적용범위

    축‧수산물 등에 적용한다.

    2) 분석원리

    검체 중의 분석대상물질을 삼불화초산이 함유된 아세토니트릴과 황산마그네슘, 염화나트륨, 시트르산나트륨, 시트르산수소나트륨으로 추출하고 C18과 황산마그네슘을 이용하여 정제한 후 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

    3) 장치

    액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

    4) 시약 및 시액

    가) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

    나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

    다) 표준원액 : 표준품을 100 mL 용량플라스크에 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

    라) 표준용액 : 표준원액을 메탄올로 희석하여 적당한 농도가 되게 한다.

    마) 0.1% 삼불화초산(Trifluroacetic acid, TFA)이 함유된 아세토니트릴 : 1,000 mL 용량플라스크에 삼불화초산 1 mL을 넣고 아세토니트릴로 표시선까지 채운다.

    바) 0.2% 개미산(Formic acid) : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산(Formic acid) 2 mL을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

    사) 10 mM 개미산암모늄(Ammonium formate)을 함유한 물 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산암모늄 0.63 g을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

    아) 10 mM 개미산암모늄(Ammonium formate)을 함유한 메탄올 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산암모늄 0.63 g을 넣고 메탄올로 표시선까지 채운다.

    자) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

    5) 시험용액의 조제

    균질화된 검체 5 g을 50 mL 원심 분리관에 취하고 0.1% 삼불화초산이 함유된 아세토니트릴 20 mL을 가한 후 5분간 진탕한다. 염화나트륨 1 g, 황산마그네슘 4 g, 시트르산나트륨 1 g, 시트르산수소나트륨 0.5 g을 넣어 5분간 진탕한 후, 4℃, 2,600G에서 15분간 원심 분리하고 상층액을 취하여 50℃에서 10 mL이 되도록 질소 농축한다. 여기에 C18150 mg과 황산마그네슘 900 mg을 넣어 5분간 진탕한 후 4℃, 2,600G에서 15분간 원심 분리한다. 상층액을 취하여 50℃에서 질소농축한 후 이동상A 0.5 mL와 이동상B 0.5 mL에 녹여 4℃, 15,000G에서 10분간 원심 분리한 후, 0.45 μm 필터(Polytetrafluoroethylene, PTFE)로 여과시킨 것을 시험용액으로 한다.

    6) 시험조작

    가) 액체크로마토그래프 측정조건

    (1) 칼럼:C18(2.1 × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

    (2) 이동상

    (가)이동상 A : 0.2% 개미산 : 10 mM 개미산암모늄을 함유한 물(1:1, v/v)

    (나)이동상 B : 0.2% 개미산 : 10 mM 개미산암모늄을 함유한 메탄올(1:1, v/v)

    시간(분)

    이동상 A(%)

    이동상 B(%)

    0

    95

    5

    1

    95

    5

    2

    5

    95

    10

    5

    95

    11

    95

    5

    15

    95

    5

    (3) 유속 : 0.3 mL/분

    (4) 칼럼온도 : 30℃

    (5) 주입량 : 10 μL

    나) 질량분석기 조건

    (1) Ionization : ESI(Positive)

    (2) Capillary temperature : 350℃

    (3) Collision gas : N2(질소)

    (4) 분석대상물질의 개별 조건

    물질명

    (Compound)

    머무름 시간(분)

    분자량

    선구이온

    (Precusor

    ion, m/z)

    생성이온

    (Product

    ion, m/z)

    충돌에너지

    (CollisionEnergy, eV)

    페노부카브

    (Fenobucarb)

    6.73

    207.27

    208

    95

    17

    152

    11

    77

    51

    ※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

    ※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

    7) 정성시험

    가) 위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Response ratio)을 비교하여 그 비율이 20~30% 이내에서 일치하여야 한다. ※주1 참조

    주1. 생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

    이온간 반응세기의 비율(%)

    허용범위

    > 50%

    ≤ 20%

    20% ~ 50%

    ≤ 25%

    > 10% ~ < 20%

    ≤ 30%

    나) 표준품 크로마토그램