8.3.79 페노티아진(Phenothiazine)

1) 시험법 적용범위

축산물(식육) 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중의 분석대상물질을 개미산과 개미산암모늄이 함유된 아세토니트릴로 추출하여 헥산으로 정제한 후 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 표준품을 100 mL 용량플라스크에 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 메탄올로 희석하여 적당한 농도가 되게 한다.

마) 0.2% 개미산이 함유된 아세토니트릴 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산(Formic acid) 2 mL을 넣고 아세토니트릴로 표시선까지 채운다.

바) 개미산암모늄과 0.2% 개미산이 함유된 아세토니트릴 혼합용액 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산암모늄 0.63 g을 넣고 20 mL 증류수에 녹인 후 0.2% 개미산이 함유된 아세토니트릴로 표시선까지 채운다.

사) 0.2% 개미산(Formic acid) : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산(Formic acid) 2 mL을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

아) 10 mM 개미산암모늄(Ammonium formate)을 함유한 물 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산암모늄 0.63 g을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

자) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화된 검체 5 g을 50 mL 원심 분리관에 취하고 개미산암모늄과 0.2% 개미산이 함유된 아세토니트릴 혼합용액(바) 20 mL 가한 뒤 5분간 진탕한다. 이를 2,600G에서 15분간 원심 분리한 후 상층액을 취한 뒤 헥산 20 mL을 첨가하여 5분간 진탕한다. 2,600G에서 15분간 원심 분리한다. 하층액을 취하여 50℃에서 질소농축한 후 아세토니트릴 3 mL로 재분산하여 4℃, 15,000G에서 10분간 원심 분리하여 0.45 μm 필터(Polytetrafluoroethylene, PTFE)로 여과시킨 것을 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：C18(2.1 × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가)이동상 A : 0.2% 개미산 : 10 mM 개미산암모늄을 함유한 물(1:1, v/v)

(나) 이동상 B : 아세토니트릴

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	95	5
5	70	30
15	70	30
20	95	5
25	95	5

(3) 유속 : 0.2 mL/분

(4) 칼럼온도 : 35℃

(5) 주입량 : 10 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI(Positive)

(2) Capillary temperature : 350℃

(3) Collision gas : N2(질소)

(4) 분석대상물질의 개별 조건

물질명 (Compound)	머무름 시간(분)	분자량	선구이온 (Precusor ion, m/z)	생성이온 (product ion, m/z)	충돌에너지 (CollisionEnergy, eV)
페노티아진 (Phenothiazine)	13.00	199.27	199	167	33
				166	39
				139	53

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성시험

가) 위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Response ratio)을 비교하여 그 비율이 20～30% 이내에서 일치하여야 한다. ※주1 참조

주1. 생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50%	≤ 20%
20% ～ 50%	≤ 25%
> 10% ～ < 20%	≤ 30%

나) 표준품 크로마토그램