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▶ 제 8. 일반시험법 ▶ 7. 식품 중 잔류농약 시험법 ▶ 7.3 축·수산물의 잔류물질 ▶ 7.3.1 다성분 시험법 (multiresidue methods) ▶ 7.3.1.9 디플루벤주론 등 16종 다성분 시험법
  • 7.3.1.9 디플루벤주론 등 16종 다성분 시험법

    가. 시험법 적용범위

    소고기, 돼지고기, 가금류고기, 유, 알 등 축산물(지방 포함)에 적용한다.

    나. 분석원리

    시료를 1% 아세트산 함유 아세토니트릴로 추출하고 d-SPE(dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

    다. 장치

    1) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

    라. 시약 및 시액

    1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

    2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

    3) 표준원액 : 농약 표준품을 아세토니트릴에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

    4) 표준용액 : 표준원액을 무처리 시료추출물*을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료추출물 90% 이상 포함).

    *무처리 시료추출물 : 분석대상 농약을 포함하지 않은 시료를 시험용액과 동일한 방법으로 추출, 정제한 것을 말한다.

    5) d-SPE : 무수황산마그네슘(MgSO4, anhydrous magnesium sulfate), C 18(octadecyl bonded silica), 1차 2차 아민(PSA, Primary Secondary Amine)

    6) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

    마. 시험용액의 조제

    1) 추출

    가) 지방을 제외한 축산물

    균질화한 시료 5 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고 1% 아세트산 함유 아세토니트릴 10 mL를 넣어 30분간 강하게 흔들어 추출한다. 여기에 무수황산마그네슘 6 g과 아세트산나트륨 1.5 g을 넣고 1분간 흔들어 섞은 후 4℃, 4,000G에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다. 새로운 15 mL 원심분리관에 상층액을 옮겨–20℃에서 1시간 방치한 후 -4℃, 4,000G에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다.

    나) 고기 중 지방(f)

    균질화한 고기류 30~50 g(지방함량이 3 g이 되도록)을 용기에 넣고 무수황산나트륨 약 50 g을 넣어 섞은 후 여기에 석유에테르 또는 헥산 150 mL를 넣어 5분간 흔들어 혼합한 후 여과보조제(Celite 545)를 깔은 부흐너깔때기에서 감압 여과한다. 잔류물은 석유에테르 또는 헥산 50 mL로 재추출하여 위의 여과액과 합하고 무수황산나트륨으로 탈수한 후 40℃ 이하에서 감압하여 용매를 날린 후 3 g을 정밀히 달아 1% 아세트산 함유 아세토니트릴 9 mL를 넣어 30분간 강하게 흔들어 추출한다. 여기에 무수황산마그네슘 6 g과 아세트산나트륨 1.5 g을 넣어 1분간 흔들어 섞은 후 4℃, 4,000G에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다. 상층액을 –20℃에서 1시간 방치한 후 –4℃, 4,000G에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다.

    2) 정제

    무수황산마그네슘 450 mg, 1차 2차 아민 150 mg, C18150 mg이 담긴 15 mL 원심분리관에 ‘1)추출’로부터 얻은 상층액 3 mL를 넣고 1분간 충분히 혼합한 후 이를 원심분리 등의 방법으로 층을 분리한다. 상층액을 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과하여 시험용액으로 한다.

    바. 시험조작

    1) 액체크로마토그래프 분석조건

    가) 컬럼 : C18계 역상 컬럼 또는 이와 동등한 것

    나) 컬럼 온도 : 40℃

    다) 이동상

    (1) 이동상 A : 0.1% 포름산 및 5 mM 포름산암모늄을 함유한 물

    (2) 이동상 B : 0.1% 포름산 및 5 mM 포름산암모늄을 함유한 메탄올

    (3) 농도구배조건

    시간(분)

    A(%)

    B(%)

    0.0

    90

    10

    0.5

    90

    10

    1.0

    40

    60

    6.0

    10

    90

    8.0

    0

    100

    10.0

    0

    100

    10.1

    90

    10

    13.0

    90

    10

    라) 이동상 유속 : 0.2 mL/분

    마) 주입량 : 5 μL

    2) 질량분석기 분석조건

    가) 이온화 방법 : ESI positive-ion mode

    나) Capillary voltage : 3.5 kV

    다) Collision gas : 아르곤(Ar)

    라) 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

    분석성분

    (Compound)

    머무름시간

    (min)

    분자량

    (MW)

    관측질량

    (Exact mass)

    선구이온

    (Precursorion,m/z)

    생성이온

    (Product ion,m/z)

    충돌

    에너지

    (Collision energy, eV)

    1

    디플루벤주론

    (Diflubenzuron)

    6.3

    310.7

    310.03

    311

    1581)

    16

    141

    40

    2

    메토밀

    (Methomyl)

    3.0

    162.2

    162.04

    163

    881)

    8

    106

    8

    3

    메토프렌*

    (Methoprene)

    9.1

    310.5

    310.25

    311

    1911)

    10

    279

    5

    4

    메티오카브

    (Methiocarb)

    5.5

    225.3

    225.08

    226

    1691)

    5

    121

    18

    5

    바이오에스메트린

    (Bioresmethrin)

    9.0

    338.4

    338.18

    339

    1711)

    12

    128

    48

    6

    벤디오카브

    (Bendiocarb)

    4.1

    223.2

    223.08

    224

    1671)

    8

    109

    20

    7

    알디카브

    (Aldicarb)

    3.8

    190.3

    190.07

    208

    116

    4

    89

    16

    8

    에티오펜카브

    (Ethiofencarb)

    4.5

    225.3

    225.08

    226

    1071)

    20

    77

    50

    9

    카바릴

    (Carbaryl)

    4.3

    201.2

    201.07

    202

    1451)

    8

    127

    32

    10

    카보퓨란

    (Carbofuran)

    4.2

    221.3

    221.10

    222

    1651)

    12

    123

    24

    3-수산화카보퓨란

    (3-hydroxycarbofuran)

    3.3

    237.3

    237.10

    255

    1631)

    20

    11

    클로펜테진

    (Clofentezine)

    7.0

    303.1

    302.01

    303

    1381)

    12

    102

    48

    12

    펜피록시메이트

    (Fenpyroximate)

    8.5

    421.5

    421.20

    422

    3661)

    16

    138

    36

    13

    프로파자이트

    (Propargite)

    8.3

    350.5

    350.15

    368

    2311)

    8

    57

    20

    14

    프로폭서

    (Propoxur)

    4.2

    209.2

    209.10

    210

    1111)

    5

    168

    15

    15

    플루메트린

    (Flumethrin)

    9.1

    510.4

    509.09

    527

    2671)

    18

    239

    18

    16

    피리미카브

    (Pirimicarb)

    4.3

    238.3

    238.14

    239

    721)

    24

    182

    16

    1)정량이온

    ※ 위의 분석대상 성분 중 ‘*’ 표시된 농약이 포유류 및 지방에서 검출될 경우 단성분 시험법으로 정량분석을 한다.

    3) 검량선 작성

    표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

    4) 표준품의 크로마토그램

    디플루벤주론

    메토밀

    메토프렌

    메티오카브

    바이오에스메트린