7.3.1.9 디플루벤주론 등 16종 다성분 시험법
가. 시험법 적용범위
소고기, 돼지고기, 가금류고기, 유, 알 등 축산물(지방 포함)에 적용한다.
나. 분석원리
시료를 1% 아세트산 함유 아세토니트릴로 추출하고 d-SPE(dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.
다. 장치
1) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)
라. 시약 및 시액
1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급
2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것
3) 표준원액 : 농약 표준품을 아세토니트릴에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.
4) 표준용액 : 표준원액을 무처리 시료추출물*을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료추출물 90% 이상 포함).
*무처리 시료추출물 : 분석대상 농약을 포함하지 않은 시료를 시험용액과 동일한 방법으로 추출, 정제한 것을 말한다.
5) d-SPE : 무수황산마그네슘(MgSO4, anhydrous magnesium sulfate), C 18(octadecyl bonded silica), 1차 2차 아민(PSA, Primary Secondary Amine)
6) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급
마. 시험용액의 조제
1) 추출
가) 지방을 제외한 축산물
균질화한 시료 5 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고 1% 아세트산 함유 아세토니트릴 10 mL를 넣어 30분간 강하게 흔들어 추출한다. 여기에 무수황산마그네슘 6 g과 아세트산나트륨 1.5 g을 넣고 1분간 흔들어 섞은 후 4℃, 4,000G에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다. 새로운 15 mL 원심분리관에 상층액을 옮겨–20℃에서 1시간 방치한 후 -4℃, 4,000G에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다.
나) 고기 중 지방(f)
균질화한 고기류 30~50 g(지방함량이 3 g이 되도록)을 용기에 넣고 무수황산나트륨 약 50 g을 넣어 섞은 후 여기에 석유에테르 또는 헥산 150 mL를 넣어 5분간 흔들어 혼합한 후 여과보조제(Celite 545)를 깔은 부흐너깔때기에서 감압 여과한다. 잔류물은 석유에테르 또는 헥산 50 mL로 재추출하여 위의 여과액과 합하고 무수황산나트륨으로 탈수한 후 40℃ 이하에서 감압하여 용매를 날린 후 3 g을 정밀히 달아 1% 아세트산 함유 아세토니트릴 9 mL를 넣어 30분간 강하게 흔들어 추출한다. 여기에 무수황산마그네슘 6 g과 아세트산나트륨 1.5 g을 넣어 1분간 흔들어 섞은 후 4℃, 4,000G에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다. 상층액을 –20℃에서 1시간 방치한 후 –4℃, 4,000G에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다.
2) 정제
무수황산마그네슘 450 mg, 1차 2차 아민 150 mg, C18150 mg이 담긴 15 mL 원심분리관에 ‘1)추출’로부터 얻은 상층액 3 mL를 넣고 1분간 충분히 혼합한 후 이를 원심분리 등의 방법으로 층을 분리한다. 상층액을 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과하여 시험용액으로 한다.
바. 시험조작
1) 액체크로마토그래프 분석조건
가) 컬럼 : C18계 역상 컬럼 또는 이와 동등한 것
나) 컬럼 온도 : 40℃
다) 이동상
(1) 이동상 A : 0.1% 포름산 및 5 mM 포름산암모늄을 함유한 물
(2) 이동상 B : 0.1% 포름산 및 5 mM 포름산암모늄을 함유한 메탄올
(3) 농도구배조건
시간(분) |
A(%) |
B(%) |
0.0 |
90 |
10 |
0.5 |
90 |
10 |
1.0 |
40 |
60 |
6.0 |
10 |
90 |
8.0 |
0 |
100 |
10.0 |
0 |
100 |
10.1 |
90 |
10 |
13.0 |
90 |
10 |
라) 이동상 유속 : 0.2 mL/분
마) 주입량 : 5 μL
2) 질량분석기 분석조건
가) 이온화 방법 : ESI positive-ion mode
나) Capillary voltage : 3.5 kV
다) Collision gas : 아르곤(Ar)
라) 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온
분석성분 (Compound) |
머무름시간 (min) |
분자량 (MW) |
관측질량 (Exact mass) |
선구이온 (Precursorion,m/z) |
생성이온 (Product ion,m/z) |
충돌 에너지 (Collision energy, eV) |
|
1 |
디플루벤주론 (Diflubenzuron) |
6.3 |
310.7 |
310.03 |
311 |
1581) |
16 |
141 |
40 |
||||||
2 |
메토밀 (Methomyl) |
3.0 |
162.2 |
162.04 |
163 |
881) |
8 |
106 |
8 |
||||||
3 |
메토프렌* (Methoprene) |
9.1 |
310.5 |
310.25 |
311 |
1911) |
10 |
279 |
5 |
||||||
4 |
메티오카브 (Methiocarb) |
5.5 |
225.3 |
225.08 |
226 |
1691) |
5 |
121 |
18 |
||||||
5 |
바이오에스메트린 (Bioresmethrin) |
9.0 |
338.4 |
338.18 |
339 |
1711) |
12 |
128 |
48 |
||||||
6 |
벤디오카브 (Bendiocarb) |
4.1 |
223.2 |
223.08 |
224 |
1671) |
8 |
109 |
20 |
||||||
7 |
알디카브 (Aldicarb) |
3.8 |
190.3 |
190.07 |
208 |
116 |
4 |
89 |
16 |
||||||
8 |
에티오펜카브 (Ethiofencarb) |
4.5 |
225.3 |
225.08 |
226 |
1071) |
20 |
77 |
50 |
||||||
9 |
카바릴 (Carbaryl) |
4.3 |
201.2 |
201.07 |
202 |
1451) |
8 |
127 |
32 |
||||||
10 |
카보퓨란 (Carbofuran) |
4.2 |
221.3 |
221.10 |
222 |
1651) |
12 |
123 |
24 |
||||||
3-수산화카보퓨란 (3-hydroxycarbofuran) |
3.3 |
237.3 |
237.10 |
255 |
1631) |
20 |
|
11 |
클로펜테진 (Clofentezine) |
7.0 |
303.1 |
302.01 |
303 |
1381) |
12 |
102 |
48 |
||||||
12 |
펜피록시메이트 (Fenpyroximate) |
8.5 |
421.5 |
421.20 |
422 |
3661) |
16 |
138 |
36 |
||||||
13 |
프로파자이트 (Propargite) |
8.3 |
350.5 |
350.15 |
368 |
2311) |
8 |
57 |
20 |
||||||
14 |
프로폭서 (Propoxur) |
4.2 |
209.2 |
209.10 |
210 |
1111) |
5 |
168 |
15 |
||||||
15 |
플루메트린 (Flumethrin) |
9.1 |
510.4 |
509.09 |
527 |
2671) |
18 |
239 |
18 |
||||||
16 |
피리미카브 (Pirimicarb) |
4.3 |
238.3 |
238.14 |
239 |
721) |
24 |
182 |
16 |
1)정량이온
※ 위의 분석대상 성분 중 ‘*’ 표시된 농약이 포유류 및 지방에서 검출될 경우 단성분 시험법으로 정량분석을 한다.
3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.
4) 표준품의 크로마토그램
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디플루벤주론 |
메토밀 |
메토프렌 |
메티오카브 |
바이오에스메트린 |
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