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▶ 제 8. 일반시험법 ▶ 7. 식품 중 잔류농약 시험법 ▶ 7.3 축·수산물의 잔류물질 ▶ 7.3.1 다성분 시험법 (multiresidue methods) ▶ 7.3.1.10 사이헥사틴(Cyhexatin), 아조사이클로틴(Azocyclotin), 펜뷰타틴 옥사이드(Fenbutatin oxide)
  • 7.3.1.10 사이헥사틴(Cyhexatin), 아조사이클로틴(Azocyclotin), 펜뷰타틴 옥사이드(Fenbutatin oxide)

    가. 시험법 적용범위

    소고기, 돼지고기, 가금류고기, 유, 알 등의 축산물에 적용한다.

    나. 분석원리

    시료를 1% 아세트산 함유 아세토니트릴 : 에틸아세테이트(1 : 1)로 추출하고 d-SPE (dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

    ※ 아조사이클로틴은 분석과정 중 사이헥사틴으로 전환됨

    다. 장치

    1) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

    라. 시약 및 시액

    1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

    2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

    3) 표준원액 : 사이헥사틴, 펜뷰타틴 옥사이드 표준품을 아세톤에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

    4) 표준용액 : 각 물질의 표준원액 100 mg/L을 메탄올에 적당한 농도로 혼합하여 희석한다. 희석한 용액은 정량 시 조직표준곡선(Tissue standard curve) 작성을 위해 각 해당 물질이 검출되지 않은 음성대조시료(Blank sample)에 공시료를 포함하여 5개 이상 농도로 전처리하여 표준용액을 제조한다.

    5) d-SPE : C18(octadecyl bonded silica), 1차 2차 아민(PSA, Primary Secondary Amine)

    6) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

    마. 시험용액의 조제

    1) 추출

    균질화한 시료 5 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고 1% 아세트산 함유 아세토니트릴 : 에틸아세테이트(1 : 1) 혼합액 10 mL를 넣어 30분간 강하게 흔들어 추출한다. 여기에 무수황산마그네슘 4 g과 염화나트륨 1 g을 넣어 1분간 흔들어 섞은 후 4℃, 4,000G에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다.

    2) 정제

    C18250 mg과 1차 2차 아민 100 mg이 담긴 15 mL 용량 원심분리관에 ‘1) 추출’ 로부터 얻은 상층액 5 mL를 넣어 1분간 강하게 흔든 후 원심분리 등의 방법으로 층을 분리한다. 새로운 15 mL 용량 원심분리관에 상층액 3 mL를 취하여 40℃에서 질소를 이용하여 농축한다. 농축 후 1% 포름산과 5 mM 포름산 암모늄이 첨가된 메탄올 1.5 mL를 넣고 5분간 초음파 처리하여 충분히 녹이고, 5분간 흔들어 섞는다. 원심분리 등의 방법으로 층을 분리한 후 상층액을 멤브레인필터 (PTFE, 0.2 μm)로 여과하여 시험용액으로 한다.

    바. 시험조작

    1) 액체크로마토그래프의 분석조건

    가) 컬럼 : C18계 역상 컬럼 또는 이와 동등한 것

    나) 컬럼 온도 : 40℃

    다) 이동상

    (1) 이동상 A : 1% 포름산 및 5 mM 포름산 암모늄 함유 물

    (2) 이동상 B : 1% 포름산 및 5 mM 포름산 암모늄 함유 메탄올

    (3) 농도구배조건

    시간(분)

    A(%)

    B(%)

    0.0

    60

    40

    2.0

    0

    100

    5.0

    0

    100

    5.1

    60

    40

    8.0

    60

    40

    라) 이동상 유속 : 0.4 mL/분

    마) 주입량 : 10 μL

    2) 질량분석기 분석조건

    가) 이온화 : ESI positive-ion mode

    나) Capillary voltage : 3.7 kV

    다) Collision gas : 아르곤(Ar)

    라) 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

    분석성분

    (Compound)

    머무름

    시간

    (min)

    분자량

    (MW)

    관측질량

    (Exact mass)

    선구이온

    (Precursor ion,m/z)

    생성이온(Product ion,m/z)

    충돌에너지

    (Collision energy, eV)

    사이헥사틴

    (Cyhexatin)

    3.2

    386.2

    387.2

    369

    2051)

    17

    81

    28

    펜뷰타틴 옥사이드

    (Fenbutatin oxide)

    3.6

    1052.7

    1052.4

    519

    1971)

    55

    351

    33

    1)정량이온

    3) 검량선의 작성

    조직표준곡선 (Tissue standard curve)에 사용되는 표준용액을 농도별로 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

    4) 표준품의 크로마토그램