8.3.86 수산화브롬글루타민 마그네슘염(L-Glutamic acid magnesium salt hydrobromide), 아미노메탄설폰산(Aminomethanesulfonic acid)

1) 시험법 적용범위

축‧수산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중의 분석대상물질을 10 mM 개미산암모늄(Ammonium formate)이 함유한 아세토니트릴로 추출하고 원심분리 하여 얻어진 상층액을 헥산으로 정제하여 농축한 후 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 각 표준품을 100 mL 용량플라스크에 정밀히 달아 증류수에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

라) 혼합표준용액 : 각 표준원액을 메탄올로 희석하여 적당한 농도가 되게 한다.

마) 10 mM 개미산암모늄(Ammonium formate)을 함유한 아세토니트릴 : 1,000 mL 용량플라스크에 0.63 g의 개미산암모늄을 넣고 20 mL의 물로 잘 녹인 뒤 아세토니트릴로 표시선까지 채운다.

바) 0.1% 개미산(Formic acid)을 함유한 물 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산 1 mL을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

사) 0.1% 개미산을 함유한 아세토니트릴 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산 1 mL을 넣고 아세토니트릴로 표시선까지 채운다.

아) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화된 검체 5 g을 50 mL 원심분리관에 취하고 10 mM 개미산암모늄이 함유된 아세토니트릴 20 mL을 가하여 15분간 진탕 혼합한 후, 4℃, 2,600G에서 15분간 원심 분리한다. 상층액을 50 mL 원심분리관에 취하고 20 mL 헥산을 넣어 10분간 진탕한 후 4℃, 2,600G에서 15분간 원심분리한다. 하층액을 15 mL 원심분리관에 취하고 40℃에서 0.5 mL이 될 때까지 질소농축한다. 0.1% 개미산을 함유한 아세토니트릴 1.5 mL을 가한 뒤 재분산하고 4℃, 15,000G에서 10분간 원심분리하여 상층액을 0.45 μm 필터(Polytetrafluoroethylene, PTFE)로 여과시킨 것을 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1)칼럼：Xbridge HILIC C18(2.1 × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A : 0.1% 개미산을 함유한 물

(나) 이동상 B : 0.1% 개미산을 함유한 아세토니트릴

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	35	65
10	35	65

(3) 유속 : 0.2 mL/분

(4) 칼럼온도 : 30℃

(5) 주입량 : 10 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI(Negative)

(2) Capillary temperature : 350℃

(3) Collision gas : N2(질소)

(4) 분석대상물질의 개별 조건

연번	물질명 (Compound)	머무름 시간(분)	분자량	선구이온 (Precusor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
1	수산화브롬글루타민 (L-Glutamic acidmagnesium salthydrobromide)	1.61	250.33	145.914	102.1	-16
					128.2	-16
					74.1	-24
2	아미노메탄설폰산(Aminomethane- sulfonic acid)	1.64	111.12	109.843	81.0	-16
					80.0	-28
					64.0	-56

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성시험

가) 정성

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Response ratio)을 비교하여 그 비율이 20～30% 이내에서 일치하여야 한다. ※주1 참조

주1. 생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50%	≤ 20%
20% ～ 50%	≤ 25%
> 10% ～ < 20%	≤ 30%

나) 표준품 크로마토그램

수산화브롬글루타민 마그네슘염 (L-Glutamic acid magnesium salt hydrobromide)