8.3.87염산메틸에페드린(DL-Methylephedrine HCl), 하이드록시디메틸피리미딘(2-Hydroxy-4,6- dimethylpyrimidine)
1) 시험법 적용범위
축‧수산물 등에 적용한다.
2) 분석원리
검체 중의 분석대상물질을 10 mM 개미산암모늄(Ammonium formate)을 함유한 아세토니트릴로 추출하고 헥산으로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.
3) 장치
액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)
4) 시약 및 시액
가) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것
나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것
다) 표준원액 : 각 표준품을 100 mL 용량플라스크에 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.
라) 혼합표준용액 : 각 표준원액을 메탄올로 희석하여 적당한 농도가 되게 한다.
마) 10 mM 개미산암모늄을 함유한 물 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산암모늄 0.63 g을 넣고 물로 표시선까지 채운다.
바) 10 mM 개미산암모늄을 함유한 아세토니트릴 : 1,000 mL 용량플라스크에 20 mL의 물과 0.63 g의 개미산암모늄을 넣고 잘 녹인 뒤 아세토니트릴로 표시선까지 채운다.
사) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것
5) 시험용액의 조제
균질화된 검체 5 g을 50 mL 원심분리관에 취하고 10 mM 개미산암모늄을 함유한 아세토니트릴 20 mL을 가하여 15분간 진탕 혼합한 후, 4℃, 2,600G에서 15분간 원심 분리한다. 상징액을 50 mL 원심분리관에 취하고 여기에 20 mL 헥산을 넣어 10분간 진탕 혼합한 후 4℃, 2,600G에서 15분간 원심분리한다. 하층액을 15 mL 원심분리관에 담아 40℃에서 0.5 mL이 될 때까지 질소농축한 후 아세토니트릴 1.5 mL을 가한 뒤 재분산하고 4℃, 15,000G에서 10분간 원심분리 하여 상층액을 0.45 μm 멤브레인 필터(Polytetrafluoroethylene, PTFE)로 여과시킨 것을 시험용액으로 한다.
6) 시험조작
가) 액체크로마토그래프 측정조건
(1) 칼럼:Xbridge HILIC(2.1 × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것
(2) 이동상
(가) 이동상 A : 10 mM 개미산암모늄을 함유한 물
(나) 이동상 B : 아세토니트릴(ACN)
시간(분) |
이동상 A(%) |
이동상 B(%) |
0 |
25 |
75 |
10 |
25 |
75 |
(3) 유속 : 0.2 mL/분
(4) 칼럼온도 : 30℃
(5) 주입량 : 10 μL
나) 질량분석기 조건
(1) Ionization : ESI(Positive)
(2) Capillary temperature : 350℃
(3) Collision gas : N2(질소)
(4) 분석대상물질의 개별 조건
연번 |
물질명 (Compound) |
머무름 시간(분) |
분자량 |
선구이온 (Precusor ion, m/z) |
생성이온 (Product ion, m/z) |
충돌에너지 (Collision energy, eV) |
1 |
염산메틸 에페드린 (DL-methylephedrine HCl) |
1.98 |
215.72 |
179.881 |
162.1 |
15 |
117.1 |
27 |
|||||
91.1 |
43 |
|||||
2 |
하이드록시디메틸피리미딘 (2-Hydroxy-4,6-dimethylpyrimidine) |
1.89 |
124.14 |
125.147 |
82.2 |
23 |
42.2 |
43 |
|||||
107.1 |
21 |
※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임
※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함
7) 정성시험
가) 정성
위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Response ratio)을 비교하여 그 비율이 20~30 % 이내에서 일치하여야 한다. ※주1 참조
주1. 생성이온간 반응세기의 비율 허용범위
이온간 반응세기의 비율(%) |
허용범위 |
> 50% |
≤ 20% |
20% ~ 50% |
≤ 25% |
> 10% ~ < 20% |
≤ 30% |
나) 표준품 크로마토그램
|