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▶ 제 8. 일반시험법 ▶ 8. 식품 중 잔류동물용의약품시험법 ▶ 8.3 정량시험법 ▶ 8.3.92 클라노부틴(Clanobutin), 나프타존(Naftazone), 디클로르보스(Dichlorvos)
  • 8.3.92 클라노부틴(Clanobutin), 나프타존(Naftazone), 디클로르보스(Dichlorvos)

    1) 시험법 적용범위

    축산물 등에 적용한다.

    2) 분석원리

    검체 증분석대상물질을0.1% 개미산 함유 아세토니트릴 용액으로 추출하고 헥산으로 정제한 후 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

    3) 장치

    액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

    4) 시약 및 시액

    가) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

    나) 물: 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

    다) 표준원액: 100 mL 용량플라스크에 각 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다. 조제된 표준원액은 냉동 보관한다.

    라) 혼합표준용액: 100 mL 용량플라스크에 각 표준원액을 메탄올로 희석하여 적당한 농도가 되게 하여 사용한다.

    마) 0.1% 개미산(Formic acid) 함유 아세토니트릴 용액 : 1,000 mL 용량 플라스크에 개미산 1 mL를 넣고 아세토니트릴로 표시선까지 채운다.

    바) 0.1% 개미산 함유 10 mM 포름산암모늄(Ammonium formate) 용액: 1,000 mL 용량플라스크에 개미산 1 mL를 넣고 포름산암모늄 0.63g을 넣어 물로 표시선까지 채운다.

    사) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

    5) 시험용액의 조제

    균질화한 검체 5 g을 50 mL 원심분리관에 취하고, 0.1% 개미산 함유 아세토니트릴 용액 8 mL를 가한다. 이를 10분간 진탕 혼합한 후 4℃에서 2,600G로 15분간 원심분리하여 상층액 ⓐ를 취한다. 잔류물에 다시 0.1% 개미산 함유 아세토니트릴 용액을 7 mL 가하여 10분간 진탕한 후 4℃에서 2,600G로 15분간 원심분리하여 상층액 ⓑ를 취한다. 새로운 50 mL 원심분리관에 상층액 ⓐ와 ⓑ를 합한 후 헥산 15 mL를 넣고 10분간 진탕하고 4℃에서 2,600G로 15분간 원심분리한다. 하층액을 취하여 40℃ 수용액상에서 0.5 mL가 될 때까지 질소농축한 후 0.1% 개미산 함유 10 mM 포름산암모늄 용액:아세토니트릴(1:1, v/v) 혼합용액 2 mL를 가하여 재분산한다. 4℃에서 15,000G로 10분간 원심분리 한 후 상층액을 0.45 μm 막여과지(PTFE membrane filter) 로 여과시킨 것을 시험용액으로 한다.

    6) 시험조작1

    가) 액체크로마토그래프 측정조건

    (1) 칼럼:C18(Gemini-Nx 2.0 × 100 mm, 3.0 μm) 또는 이와 동등한 것

    (2) 이동상

    (가) 이동상 A: 0.1% 개미산 함유 10 mM 포름산암모늄 용액

    (나)이동상 B: 아세토니트릴

    시간(분)

    이동상 A(%)

    이동상 B(%)

    0

    95

    5

    2

    95

    5

    3

    5

    95

    10

    5

    95

    11

    95

    5

    15

    95

    5

    (3) 유속: 0.20 mL/분

    (4) 칼럼온도: 30℃

    (5) 주입량: 10 μL

    나) 질량분석기 조건

    (1) Ionization: ESI(Positive, Negative)

    (2) Capillary Temperature: 350℃

    (3) Collision gas: N2(질소)

    (4) 분석대상물질의 개별 조건

    연번

    물질명

    (Compound)

    이온화 (Ionizationmode)

    머무름 시간(분)

    분자량

    (MW)

    선구이온

    (Precursor

    ion, m/z)

    생성이온

    (Product

    ion, m/z)

    충돌에너지

    (CollisionEnergy,eV)

    1

    나프타존

    (Naftazone)

    Positive

    8.04

    215.208

    216.141

    199.2

    13.00

    143.2

    27.00

    173.3

    13.00

    2

    디클로르보스

    (Dichlotvos)

    Positive

    8.13

    220.98

    221.012

    109.0

    21

    127.2

    35

    79.000

    13

    3

    클라노부틴

    (Clanobutin)

    Negative

    8.47

    347.796

    346.045

    260.1

    -16

    245.1

    -38

    134.0

    -54

    ※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

    ※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

    7) 정성시험

    가) 정성

    위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Response ratio)을 비교하여 그 비율은 주1)과 일치하여야 한다.

    주1. 생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

    이온간 반응세기의 비율(%)

    허용범위

    > 50 %

    ≤ 20 %

    > 20 % ∼ ≤ 50 %

    ≤ 25 %

    > 10 % ∼ ≤ 20 %

    ≤ 30 %

    나) 표준품 크로마토그램

    나프타존(8.04분)