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▶ 제 8. 일반시험법 ▶ 8. 식품 중 잔류동물용의약품시험법 ▶ 8.3 정량시험법 ▶ 8.3.105 에마멕틴(Emamectin)
  • 8.3.105 에마멕틴(Emamectin)

    1) 시험법 적용범위

    수산물 등에 적용한다.

    2) 분석원리

    검체 중 분석대상물질을 초산암모늄, EDTA(Ethylene Diamine Tetra Acetate, 아세토니트릴, 염화나트륨으로 추출하여 PSA(Primary Secondary Amine), C18, 황산마그네슘(MgSO4)로 정제한 후 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

    3) 장치

    액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

    4) 시약 및 시액

    가) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

    나) 물: 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

    다) 표준원액: 에마멕틴 B1a 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다. 조제된 표준원액은 냉동 보관한다.

    라) 표준용액: 표준원액을 50% 메탄올로 희석하여 적당한 농도가 되게 한다.

    마) 0.1% 개미산(Formic acid) : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산 1 mL을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

    바) 0.1% 개미산을 함유한 메탄올 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산 1 mL을 넣고 메탄올로 표시선까지 채운다.

    사) 추출용액 (50 mM ammonium acetate buffer(pH 4.1), 0.1 M EDTA): 500 mL 용량플라스크에 물을 적당히 넣은 뒤 초산암모늄 1,927 mg을 넣고 잘 섞어준다. 물로 표선을 맞추고 초산으로 pH를 조정한 후, EDTA 14.6 g을 넣고 충분히 녹을 때까지 초음파분쇄한다 (약 1시간, 상온에서 보관하며 상층액만 사용).

    아) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

    5) 시험용액의 조제

    균질화한 검체 5 g을 50 mL 원심분리관에 취하고, 추출용액 4 mL를 가한 후 1분간 진탕한다. 여기에 아세토니트릴 12 mL와 염화나트륨 2 g을 가한 뒤 10분간 진탕하고 4℃에서 2,700G로 10분간 원심분리한다. 상층액을 37.5 mg PSA, 37.5 mg C18, 225 mg MgSO4가 담겨진 15 mL 원심분리관에 취하여 1분간 진탕하고 4℃에서 2,700G로 10분간 원심분리한다. 상층액을 새로운 15 mL 원심분리관에 취하여 50°C에서 질소농축한 후 잔류물에 메탄올 0.5 mL와 0.1% 개미산 0.5 mL를 가하여 재분산하여 1분간 진탕하고 5분간 초음파처리한 후 4℃에서 13,500G로 3분간 원심분리한다. 원심분리된 상층액을 시험용액으로 한다.

    6) 시험조작

    가) 액체크로마토그래프 측정조건

    (1) 칼럼: Phenomenex Luna C18(2.0 × 150 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

    (2) 이동상 :

    (가) 이동상 A : 0.1% 개미산

    (나) 이동상 B : 0.1% 개미산을 함유한 메탄올

    시간(분)

    이동상 A(%)

    이동상 B(%)

    0

    25

    75

    15

    25

    75

    (3) 유속 : 0.25 mL/분

    (4) 칼럼온도 : 40℃

    (5) 주입량 : 3 μL

    나) 질량분석기 조건

    (1) Ionization : ESI (positive)

    (2) Capillary temperature : 400℃

    (3) Collision gas : N2(질소)

    (4) 분석대상물질의 개별 조건

    물질명

    (Compound)

    머무름 시간(분)

    분자량

    선구이온

    (Precusor

    ion, m/z)

    생성이온

    (Fragment

    ion, m/z)

    충돌에너지

    (Collision Energy, eV)

    에마멕틴 B1a

    (Emamectin)

    3.99

    886.13

    887

    158.1

    51

    81.9

    103

    126.1

    65

    ※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온은 정성이온임

    ※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

    7) 정성시험

    가) 정성

    위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(precursor ion) 및 생성이온(product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(response ratio)을 비교하여 그 비율은 주1)과 일치하여야 한다.

    주1). 생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

    이온간 반응세기의 비율(%)

    허용범위

    > 50 %

    ≤ 20 %

    > 20 %, ≤ 50 %

    ≤ 25 %

    > 10 %, ≤ 20 %

    ≤ 30 %

    나) 표준품 크로마토그램