8.3.105 에마멕틴(Emamectin)
1) 시험법 적용범위
수산물 등에 적용한다.
2) 분석원리
검체 중 분석대상물질을 초산암모늄, EDTA(Ethylene Diamine Tetra Acetate, 아세토니트릴, 염화나트륨으로 추출하여 PSA(Primary Secondary Amine), C18, 황산마그네슘(MgSO4)로 정제한 후 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.
3) 장치
액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)
4) 시약 및 시액
가) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것
나) 물: 3차 증류수 또는 이와 동등한 것
다) 표준원액: 에마멕틴 B1a 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다. 조제된 표준원액은 냉동 보관한다.
라) 표준용액: 표준원액을 50% 메탄올로 희석하여 적당한 농도가 되게 한다.
마) 0.1% 개미산(Formic acid) : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산 1 mL을 넣고 물로 표시선까지 채운다.
바) 0.1% 개미산을 함유한 메탄올 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산 1 mL을 넣고 메탄올로 표시선까지 채운다.
사) 추출용액 (50 mM ammonium acetate buffer(pH 4.1), 0.1 M EDTA): 500 mL 용량플라스크에 물을 적당히 넣은 뒤 초산암모늄 1,927 mg을 넣고 잘 섞어준다. 물로 표선을 맞추고 초산으로 pH를 조정한 후, EDTA 14.6 g을 넣고 충분히 녹을 때까지 초음파분쇄한다 (약 1시간, 상온에서 보관하며 상층액만 사용).
아) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것
5) 시험용액의 조제
균질화한 검체 5 g을 50 mL 원심분리관에 취하고, 추출용액 4 mL를 가한 후 1분간 진탕한다. 여기에 아세토니트릴 12 mL와 염화나트륨 2 g을 가한 뒤 10분간 진탕하고 4℃에서 2,700G로 10분간 원심분리한다. 상층액을 37.5 mg PSA, 37.5 mg C18, 225 mg MgSO4가 담겨진 15 mL 원심분리관에 취하여 1분간 진탕하고 4℃에서 2,700G로 10분간 원심분리한다. 상층액을 새로운 15 mL 원심분리관에 취하여 50°C에서 질소농축한 후 잔류물에 메탄올 0.5 mL와 0.1% 개미산 0.5 mL를 가하여 재분산하여 1분간 진탕하고 5분간 초음파처리한 후 4℃에서 13,500G로 3분간 원심분리한다. 원심분리된 상층액을 시험용액으로 한다.
6) 시험조작
가) 액체크로마토그래프 측정조건
(1) 칼럼: Phenomenex Luna C18(2.0 × 150 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것
(2) 이동상 :
(가) 이동상 A : 0.1% 개미산
(나) 이동상 B : 0.1% 개미산을 함유한 메탄올
시간(분) |
이동상 A(%) |
이동상 B(%) |
0 |
25 |
75 |
15 |
25 |
75 |
(3) 유속 : 0.25 mL/분
(4) 칼럼온도 : 40℃
(5) 주입량 : 3 μL
나) 질량분석기 조건
(1) Ionization : ESI (positive)
(2) Capillary temperature : 400℃
(3) Collision gas : N2(질소)
(4) 분석대상물질의 개별 조건
물질명 (Compound) |
머무름 시간(분) |
분자량 |
선구이온 (Precusor ion, m/z) |
생성이온 (Fragment ion, m/z) |
충돌에너지 (Collision Energy, eV) |
에마멕틴 B1a (Emamectin) |
3.99 |
886.13 |
887 |
158.1 |
51 |
81.9 |
103 |
||||
126.1 |
65 |
※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온은 정성이온임
※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함
7) 정성시험
가) 정성
위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(precursor ion) 및 생성이온(product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(response ratio)을 비교하여 그 비율은 주1)과 일치하여야 한다.
주1). 생성이온간 반응세기의 비율 허용범위
이온간 반응세기의 비율(%) |
허용범위 |
> 50 % |
≤ 20 % |
> 20 %, ≤ 50 % |
≤ 25 % |
> 10 %, ≤ 20 % |
≤ 30 % |
나) 표준품 크로마토그램