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▶ 제 8. 일반시험법 ▶ 8. 식품 중 잔류동물용의약품시험법 ▶ 8.3 정량시험법 ▶ 8.3.106 디클로페낙(Diclofenac), 메토서페이트(Metoserpate), 부퀴놀레이트 (Buquinolate)
  • 8.3.106 디클로페낙(Diclofenac), 메토서페이트(Metoserpate), 부퀴놀레이트 (Buquinolate)

    1) 시험법 적용범위

    축산물 등에 적용한다.

    2) 분석원리

    검체 중의 분석대상물질을 개미산암모늄이 함유된 아세토니트릴로 추출하고 헥산으로 정제한 후 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

    3) 장치

    액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

    4) 시약 및 시액

    가) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

    나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

    다) 표준원액 : 100 mL 용량플라스크에 각 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다. 조제된 표준원액은 냉동 보관한다.

    라) 혼합표준용액 : 100 mL 용량플라스크에 각 표준원액을 메탄올로 희석하여 적당한 농도가 되게 하여 사용한다.

    마) 0.1% 아세트산(Acetic acid) 용액 : 1,000 mL 용량플라스크에 아세트산 1 mL을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

    바) 0.1% 개미산(Formic acid)을 함유한 아세토니트릴 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산 1 mL을 넣고 아세토니트릴로 표시선까지 채운다.

    바) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

    5) 시험용액의 조제

    균질화된 검체 2 g을 50 mL 원심분리관에 취하고 0.1% 개미산을 함유한 아세토니트릴을 10 mL을 가하여 10분간 진탕 혼합한 후 4℃에서 2,600G로 15분간 원심 분리한다. 상층액을 50 mL 원심분리관에 취하여 헥산 10 mL을 넣고 10분간 진탕 혼합한 후 4℃에서 2,600G로 15분간 원심분리한다. 하층액을 15 mL 원심분리관에 담아 40℃ 수용액상에서 0.3 mL가 될 때까지 질소농축한 후 0.1% 아세트산용액:메탄올(1:1, v/v) 혼합용액 1.7 mL을 가하여 재분산한다. 4℃에서 15,000G로 10분간 원심분리 한 후 상층액을 0.45 μm 막 여과지(PTFE membrane filter)로 여과시킨 것을 시험용액으로 한다.

    6) 시험조작

    가) 액체크로마토그래프 측정조건

    (1) 칼럼:C18(Phenomenex Luna 2.0 × 100 mm, 3.0 μm) 또는 이와 동등한 것

    (2) 이동상

    (가) 이동상 A : 0.1% 아세트산 용액

    (나) 이동상 B : 메탄올

    시간(분)

    이동상 A(%)

    이동상 B(%)

    0

    90

    10

    3

    90

    10

    5

    10

    90

    13

    10

    90

    15

    90

    10

    20

    90

    10

    (3) 유속 : 0.25 mL/분

    (4) 칼럼온도 : 30℃

    (5) 주입량 : 10 μL

    나) 질량분석기 조건

    (1) Ionization : ESI(positive, negative)

    (2) Capillary Temperature : 350℃

    (3) Collision gas : N2(질소)

    (4) 분석대상물질의 개별 조건(MRM 조건)

    연번

    물질명

    (Compound)

    이온화 (Ionization mode)

    머무름 시간(분)

    분자량

    (MW)

    선구이온

    (Precusor

    ion, m/z)

    생성이온

    (Product

    ion, m/z)

    충돌에너지

    (Collision Energy,eV)

    1

    디클로페낙

    (Diclofenac)

    Negative

    12.58

    296.1

    293.7

    250.0

    -12

    214.0

    -28

    178.0

    -38

    2

    메토서페이트

    (Metoserpate)

    Positive

    9.03

    428.5

    429.1

    174.1

    41

    131.1

    89

    130.0

    119

    3

    부퀴놀레이트

    (Buquinolate)

    Positive

    12.19

    361

    362.1

    204.0

    49

    316.2

    23

    148.1

    65

    ※밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

    ※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

    7) 정성시험

    가) 정성

    위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(precursor ion) 및 생성이온(product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(response ratio)을 비교하여 그 비율은 주1)과 일치하여야 한다.

    주1). 생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

    이온간 반응세기의 비율(%)

    허용범위

    > 50 %

    ≤ 20 %

    > 20 %, ≤ 50 %

    ≤ 25 %

    > 10 %, ≤ 20 %

    ≤ 30 %

    나) 표준품 크로마토그램