8.3.107 가미스로마이신(Gamithromycin), 설파니트란(Sulfanitran), 설파피리딘(Sulfapyridine)

1) 시험법 적용범위

축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 분석대상물질을 아세토니트릴, 염화나트륨으로 추출하고 PSA(Primary Secondary Amine), C18, 황산마그네슘(MgSO4)로 정제한 후 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물: 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액: 100 mL 용량플라스크에 각 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다. 조제된 표준원액은 냉동 보관한다.

라) 혼합 표준용액: 100 mL 용량플라스크에 각 표준원액을 50% 메탄올로 희석하여 적당한 농도가 되게 하여 사용한다.

마) 0.1% 개미산(Formic acid) 용액: 1,000 mL 용량플라스크에 개미산 1 mL를 넣고 물로 표시선까지 채운다.

바) 0.1% 개미산 함유 메탄올: 1,000 mL 용량플라스크에 개미산 1 mL을 넣고 메탄올로 표시선까지 채운다.

사) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화한 검체 2 g을 15 mL 원심분리관에 취하고, 아세토니트릴 5 mL와 염화나트륨 1 g을 가한다. 이를 10분간 진탕 혼합한 후 4℃에서 2,700G로 10분간 원심분리한다. 상층액을 25 mg PSA, 25 mg C18, 150 mg MgSO4가 담겨진 15 mL 원심분리관에 취하여 1분간 진탕하고 4℃에서 2,700G로 10분간 원심분리한다. 상층액을 취하여 40°C에서 질소농축한 후 잔류물에 0.1% 개미산 함유 메탄올 0.5 mL와 0.1% 개미산 용액 0.5 mL로 재분산한다. 이를 5분간 초음파처리한 후 4℃에서 13,500G로 3분간 원심분리한 후 상층액을 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼: C18(Phenomenex Luna 2.0 × 150 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A: 0.1% 개미산 용액

(나) 이동상 B: 0.1% 개미산 함유 메탄올

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	90	10
5	20	80
9	20	80
10	90	10
15	90	10

(3) 유속: 0.25 mL/분

(4) 칼럼온도: 40℃

(5) 주입량: 10 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization: ESI (Positive, Negative)

(2) Capillary Temperature: 350℃

(3) Collision gas: N2(질소)

(4) 분석대상물질의 개별 조건

연번	물질명 (Compound)	이온화 (Ionizationmode	머무름 시간(분)	분자량 (MW)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (CollisionEnergy, eV)
1	가미스로마이신 (Gamithromycin)	Positive	7.15	777.04	389.304	83.20	37
						72.00	71
						55.10	75
2	설파니트란 (Sulfanitran)	Negative	9.25	335.34	333.998	136.40	-44
						133.10	-36
						226.90	-42
3	설파피리딘 (Sulfapyridine)	Positive	6.05	249.29	250.112	92.10	39
						155.90	19
						64.80	57

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성시험

가) 정성

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Response ratio)을 비교하여 그 비율이 주1)과 일치하여야 한다.

주1. 생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50%	≤ 20%
> 20%, ≤ 50%	≤ 25%
> 10%, ≤ 20%	≤ 30%

나) 표준품 크로마토그램