9.5.2 식용유지 중 벤조피렌

가. 제1법

1) 시험법 적용범위
식용유지(크릴유 제외)에 적용한다.

2) 분석원리
식용유지 중 벤조피렌을 내부표준물질로 3-메틸콜란트렌을 사용하여 N,N-디메틸포름아마이드-물(9:1)과 헥산으로 추출한 후 고체상 카트리지(solid phase cartridge)로 정제하여 액체크로마토그래프/형광검출기로 분석한다.

3) 장치

가) 액체크로마토그래프/형광검출기(HPLC/FLD)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매：잔류농약시험용 또는 이와 동등한 것

나) 물：3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 플로리실 또는 실리카 카트리지: 플로리실 또는 실리카 1 g을 함유한 SPE용 또는 이와 동등한 것

라) 막 여과지(membrane filter)：수용성 폴리테트라플루오로에틸렌 또는 이와 동등한 것

마) 표준원액：벤조피렌 표준품을 아세토니트릴에 녹여 100 μg/mL로 한다.

바) 내부표준원액：3-메틸콜란트렌 표준품을 아세토니트릴에 녹여 100 μg/mL로 한다.

사) 표준용액：표준원액을 아세토니트릴을 사용하여 적당한 농도로 희석한다.

아) 내부표준용액：내부표준원액을 아세토니트릴을 사용하여 적당한 농도로 희석한다.

자) 기타시약：잔류농약시험용 또는 특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출검체 10 g을 정밀히 달아 내부표준용액 1 mL를 첨가하고 헥산 100 mL에 녹여 분액깔때기(Ⅰ)에 옮기고 N,N-디메틸포름아마이드-물(9:1) 50 mL를 넣어 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 충분히 분리시킨 후 N,N-디메틸포름아마이드-물(9:1)층을 분리하여 다른 분액깔때기(Ⅱ)에 옮긴다. 헥산층에 N,N-디메틸포름아마이드-물 25 mL씩을 넣고 위와 같이 2회 되풀이하여 N,N-디메틸포름아마이드-물(9:1)층을 분액깔때기(Ⅱ)에 합친다. 여기에 1% 황산나트륨 용액 100 mL를 넣어 섞고 헥산 50 mL를 넣어 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 충분히 분리시킨 후 헥산층을 분액깔때기(Ⅲ)에 옮긴다. N,N-디메틸포름아마이드-물(9:1)층에 헥산 35 mL씩을 넣고 위와 같이 2회 되풀이하여 헥산층을 위의 분액깔때기(Ⅲ)에 합친다. 물 40 mL씩을 넣고 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 충분히 분리시킨 후 물층은 버리는 조작을 2회 되풀이한다. 헥산층을 무수황산나트륨 약 15 g을 넣은 여과지를 사용하여 탈수여과한 후 40℃ 이하의 수욕상에서 감압하여 약 2 mL로 농축한다.

주1) 액액추출 시 층분리가 명확히 확인될 때까지 충분한 방치시간을 유지해야 한다.

나) 정제카트리지는 미리 디클로로메탄 10 mL 및 헥산 20 mL를 초당 2～3방울의 속도로 유출시킨 후 사용한다. 이 카트리지에 위의 농축액을 1 mL/분의 속도로 가한다. 이어서 헥산 5 mL와 헥산/디클로로메탄(3:1) 15 mL로 각각 용출시킨 후 이 용출액을 40℃ 이하의 수욕상에서 질소가스 하에 날려 보낸 후 잔류물을 아세토니트릴에 녹여 전량을 1 mL로 하고 이를 0.5 μm 막 여과지(membrane filter)로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼：Supelcosil
LC-PAH( 4.6 × 250 mm,5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼온도 : 35℃

(3) 이동상 : 아세토니트릴과 물의 혼합액(8:2)

(4) 이동상 유량 : 1.0 mL/min

(5) 검출기파장 : 여기파장
294 ㎚, 형광파장 404 ㎚

나) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피이크 높이 또는 피이크 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

다) 표준품의 크로마토그램