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▶ 제 8. 일반시험법 ▶ 9. 식품 중 유해물질 시험법 ▶ 9.5 벤조피렌 ▶ 9.5.4 수산물 및 그 가공품, 훈제식육가공품, 특수영양식품, 특수의료용도식품 및 크릴유 중 벤조피렌
  • 9.5.4 수산물 및 그 가공품, 훈제식육가공품, 특수영양식품, 특수의료용도식품 및 크릴유중 벤조피렌

    가. 시험법 적용범위

    수산물 및 그 가공품, 훈제식육가공품,특수영양식품, 특수의료용도식품및 크릴유에 한한다.

    나. 분석원리

    내부표준물질로 3-메틸콜란트렌을 사용하여 1M 수산화칼륨․에탄올 용액으로 알칼리 분해하고 헥산으로 추출한 후 고체상 카트리지(solid phase cartridge)로 정제하여 액체크로마토그래프/형광검출기로 분석한다.

    다. 장치

    1) 액체크로마토그래프/형광검출기(High Performance Liquid Chromatograph/ Fluorescence Detector, HPLC/FLD)를 사용한다.

    라. 시약 및 시액

    1) 용매:HPLC급 또는 이와 동등한 것

    2) 물:3차 증류수 또는 이와 동등한 것

    3) 플로리실 카트리지(Florisil cartridge):SPE용 또는 이와 동등한 것

    4) 막 여과지(membrane filter):수용성 폴리테트라플루오로에틸렌 또는 이와 동등한 것

    5) 표준원액:벤조피렌 표준물질을 아세토니트릴에 녹여 100 μg/mL로 한다.

    6) 내부표준원액:3-메틸콜란트렌 표준물질을 아세토니트릴에 녹여 100 μg/mL로 한다.

    7) 표준용액:표준원액을 아세토니트릴을 사용하여 적당한 농도로 희석한다.

    8) 내부표준용액:내부표준원액을 아세토니트릴을 사용하여 적당한 농도로 희석한다.

    9) 기타시약:잔류농약시험용 또는 특급

    마. 시험용액의 조제

    1) 추출
    균질화된 검체 약 10 g(건조물의 경우 1~2 g)을 달아 1 M 수산화칼륨·에탄올 용액 100 mL와 함께 둥근바닥 플라스크에 넣고 내부표준물질 1 mL를 첨가한 후 환류냉각장치를 부칙시킨다. 이를 미리 80℃로 예열된 전열기에서 3시간 동안 가열하여 알칼리분해시키고 신속히 냉각 후 헥산 50 mL를 환류냉각관을 통하여 넣어준다. 둥근바닥 플라스크의 알칼리 분해액을 분액깔대기에 옮기고 에탄올 : 헥산(1:1)용액 50 mL로 세척하여 분액깔때기에 합친다. 이 액에 50 mL의 물을 넣어 심하게 흔들어 섞은 후 헥산층을 분리하여 다른 분액깔때기에 받아두고 물층에 핵산 50 mL를 넣어 추출하는 과정을 두 번 반복하여 얻은 헥산층을 모두 합친다. 이 헥산층에 물 50 mL를 넣고 흔들어 섞은 후 정치하여 물층은 버리는 조작을 3회 되풀이하고 헥산층을 무수황산나트륨 약 15 g을 넣은 여과지를 사용하여 탈수여과한 후 40℃ 이하의 수욕상에서 감압하여 약 2 mL로 농축한다.

    2) 정제
    플로리실 카트리지(Florisil cartridge)는 미리 디클로로메탄 10 mL 및 헥산 20 mL를 초당 2~3방울의 속도로 유출시킨 후 사용한다. 이 카트리지에 위의 농축액을 넣고 헥산 10 mL와 헥산/디클로로메탄(3:1) 20 mL로 각각 용출시킨 후 이 용출액을 40℃ 이하의 수욕상에서 질소가스 하에 농축․건고한 후 잔류물을 아세토니트릴에 녹여 전량을 1 mL로 하고 이를 0.45 μm 막 여과지(membrane filter)로 여과하여 시험용액으로 한다.

    바. 시험조작

    1) 액체크로마토그래프의 측정조건

    가) 칼럼:Supelguard LC-18을 연결한 SupelcosilLC-PAH(25 cm× 4.6mm) 또는 이와 동등한 것

    나) 칼럼온도 : 35℃

    다) 이동상 : 아세토니트릴과 물의 혼합액(8:2)

    라) 이동상유량 : 1.0 mL/min

    마) 검출기파장 : 여기파장 294 nm, 형광파장 404 nm

    2) 검량선의 작성

    표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피이크 높이 또는 피이크 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

    3) 크로마토그램