9.15.1 리오치로닌(T3), 레보치록신(T4), 에페드린(ephedrine) 및 플루옥세틴(fluoxetine)
가. 시험법의 적용범위모든 식품에 적용한다.
나. 분석원리균질화한 검체를 취하여 액-액 추출하고 액체크로마토그래프/자외선흡광검출기(UV photometric detector), PDA검출기로 분석한다.
다. 장치액체크로마토그래프/자외선흡광검출기(HPLC/UV photometric detector), PDA검출기(HPLC/PDA), 액체크로마토그래프/질량분석기(LC/MS)를 사용한다.
라. 시약 및 시액
1) 유기용매 : 액체크로마토그래피용 또는 이와 동등한 것
2) 물 : 액체크로마토그래피용 또는 이와 동등한 것
3) 표준원액 : 리오치로닌(T3), 레보치록신(T4), 에페드린(ephedrine) 및 플루옥세틴(Fluoxetine) 각각의 표준품 20 mg을 정확히 달아 메탄올에 녹여 각각 1000 mg/L가 되게 한다.
4) 표준용액 : 표준용액(1000 ppm)을 같은 비율로 혼합하여 혼합표준용액(100 ppm)을 만들고, 혼합표준원액을 메탄올에 녹여 1∼100 mg/L의 범위가 되도록 적당한 농도로 희석한다.
마. 시험용액의 조제균질화한 검체 약 1 g을 취하여 50 mL 용량 플라스크에 넣고, 메탄올:이동상 A(7:3) 30 mL를 넣어 약 30분간 초음파 진탕 추출한 후 메탄올:이동상 A(7:3)으로 정용한다. 이 액을 여과하여 시험용액으로 사용한다. 단, 시험용액의 농도가 검량곡선의 농도범위를 벗어날 경우 농도 범위내로 희석하여 사용한다.
바. 시험조작
1) 액체크로마토그래프의 측정조건
가) 칼럼 : C18(4.6 mm × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것
나) 칼럼온도 : 40℃
다) 이동상
(1) 이동상 A : 0.5 mM sodium-1-hexane sulfonate를 함유한 0.1% 인산용액
(2) 이동상 B : 95% 아세토니트릴
시간(분) |
이동상 A(%) |
이동상 B(%) |
0 |
90 |
10 |
2 |
90 |
10 |
30 |
50 |
50 |
42 |
0 |
100 |
50 |
90 |
10 |
라) 이동상 유량 : 1.0 mL/min
마) UV 검출기파장 : 210 nm
바) PDA 검출기파장 : 200∼400 nm
2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피이크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.
3) 표준품의 크로마토그램 및 스펙트럼
(a) 리오치로닌(T3), 레보치록신(T4), 에페드린 및 플루옥세틴의 크로마토그램