9.15.6 센노사이드(sennoside A, B)

가. 시험법의 적용범위

모든 식품에 적용한다.

나. 분석원리

균질화한 검체를 취하여 액-액 추출하고 액체크로마토그래프/ 자외부흡광검출기(UV photometric detector), PDA 검출기로 분석한다.

다. 장치

1)액체크로마토그래프/자외부흡광검출기(LC/UV photometric detector), PDA 검출기(LC/PDA),
액체크로마토그래프/질량분석기(LC/MS)를 사용한다.

라. 시약 및 시액

1) 유기용매 : 액체크로마토그래피용 또는 이와 동등한 것

2) 물 : 액체크로마토그래피용 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액 : 센노사이드 A(sennodise A), 센노사이드 B(sennodise B) 각각의 표준품을 아세토나이트릴/물 혼합액 (80/20, v/v)에 녹여 각각 1,000 mg/L이 되게 한다.

4) 표준용액 :
표준원액을 각각 메탄올에 녹여 1～100 mg/L이 되도록 적당한 농도로 희석한다.

5) sodium-1-hexane sulfonate : 이온쌍 크로마토그래피용

6) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

균질화한 검체 1 g을 정확히 달아 50 mL 용량의 메스플라스크에 넣고 물 15 mL를 가하여 습윤화한다. 메스플라스크에 메탄올 25 mL를 가하여 10분간 초음파 추출한 후 메탄올로 눈금을 채우고 0.45 ㎛ 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 사용한다. 단, 시험용액의 농도가 검량곡선의 농도범위를 벗어날 경우 농도 범위내로 희석하여 사용한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프의 측정조건

가) 컬럼 : C18(4.6 mm × 250 mm, 5 ㎛) 또는 이와 동등한 것

나) 컬럼온도 : 40℃

다) 이동상

(1) 이동상 A : 0.5 mM sodium-1-hexane sulfonate를 함유한 0.1% 인산 용액

(2) 이동상 B : 95% 아세토니트릴

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	85	15
6	85	15
15	70	30
30	60	40
32	60	40
42	0	100
50	0	100
52	85	15
60	85	15

라) 이동상 유량 : 1.2 mL/min

마) UV 검출기파장 : 220 nm

바) PDA 검출기파장 : 200～400 nm

2) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

3) 표준품의 크로마토그램 및 스펙트럼