7.1.3.53 트리넥사팍에틸(Trinexapac-ethyl)

가. 시험법 적용범위곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리시료를 70% 메탄올로 추출하고 pH를 약 2.5로 맞추어 디클로로메탄으로 액-액 분배한 후, 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치

1) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매:잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

2) 물:3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액:트리넥사팍에틸 및 트리넥사팍 표준품을 각각 메탄올에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액:표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

5) 기타시약:잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 5 g을 정밀히 달아 추출 용기에 넣고 70% 메탄올 20 mL를 넣어 5분간 강하게 흔들어 섞는다. 추출물을 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 감압 여과하고 메탄올 20 mL로 잔류물 및 용기를 씻어내려 앞의 여과액과 합한다. 합친 여과액에 물 30 mL를 더하고 1 N 염산을 가해 pH를 약 2.5로 맞춘다. 이를 250 mL 분액깔때기에 옮기고 염화나트륨 5 g 및 디클로로메탄 30 mL를 차례로 넣은 후 강하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치하여 층을 분리시킨다. 디클로로메탄층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받고, 남아있는 수용액 층에 디클로로메탄 30 mL를 넣어 위의 과정을 반복한다. 이를 40℃ 이하에서 감압 농축하여 용매를 모두 날려버린 후, 잔류물에 메탄올을 넣어 최종부피 5 mL가 되게 한 뒤 멤브레인 필터로 여과한 후 시험용액으로 한다. ※ 지방성 시료의 경우 잔류물에 미리 아세토니트릴로 포화시킨 헥산 30 mL를 건조물에 넣어 녹인 후 250 mL 분량의 분액깔때기에 옮기고 미리 헥산으로 포화시킨 아세토니트릴 30 mL으로 2회 분배 추출한다. 합친 아세토니트릴층을 40℃에서 감압 농축한 후 잔류물을 메탄올을 넣어 최종부피 5 mL가 되게 한 뒤 멤브레인 필터를 이용해 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프의 분석조건

가) 컬럼:C18(2.0 mm × 100 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 컬럼 온도 : 40℃

다) 이동상

(1) 이동상 A : 0.1% 포름산 함유 물

(2) 이동상 B : 0.1% 포름산 함유 메탄올

(3) 농도구배조건

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	95	5
3.0	95	5
10.0	5	95
13.0	95	5
15.0	95	5

라) 이동상유속 :0.2 mL/분

마) 주입량 : 5 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 : ESI positive-ion mode

나) Capillary temperature : 600℃

다) Spray voltage : 3.0 kV

라) Collision gas : 아르곤(Ar)

마) 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분 (Compound)	선구이온 (Precursor ion,m/z)	생성이온(Product ion,m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
트리넥사팍에틸 (Trinexapac-ethyl)	253	691)	21
		185	11
		207	11
트리넥사팍 (Trinexapac)	225	691)	15
		111	19
		165	17

1)정량이온

3) 검량선 작성
표준용액을 메탄올에 일정농도로 희석한 다음 시료에 주입하고 시험용액의 조제과정에 따라 시험한 후, 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입한다. 이온의 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선(matrix matched calibration curve)을 작성한다.

4) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램 예시.

A : 트리넥사팍에틸(10.0분), B : 트리넥사팍(8.9분)

5) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정량시험위 조건으로 얻은 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.