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식품 및 식품첨가물공전
7.1.3.71 프로클로라즈(Prochloraz)
가. 시험법 적용범위곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.
나. 분석원리시료를 아세토니트릴로 추출하고 pyridine hydrochloride를 넣어 2,4,6-TCP(trichlorophenol)로전환하여 디클로르메탄으로 분배, 추출한 후 기체크로마토그래프로 분석한다.
다. 장치
1) 기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD)
2) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)
라. 시약 및 시액
1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급
2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것
3) 표준원액 : 표준품을 아세톤에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.
4) 표준용액 : 표준원액을 아세톤에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.
5) 기타 시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급
마. 시험용액의 조제
1) 추출
시료 30 g(곡류 및 두류는 20 g)을 정밀히 달아 추출 용기에 넣고(곡류 등 건조 시료는 물 20 mL를 넣은 후 혼합하여 2시간 방치), 아세토니트릴 100 mL를 넣고 30분간 흔들어 섞어 추출한다. 이를 여과지가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인 여과하고, 잔류물을 아세토니트릴 50 mL로 씻어 내려 앞의 여과액과 합치고 아세톤에 녹인 2% 디에틸렌글리콜용액 0.2 mL를 넣어 40℃ 이하에서 감압 농축한다. 잔류물을 물 100 mL와 디클로르메탄 50 mL으로 녹여 분액깔때기에 옮기고 포화염화나트륨용액 50 mL를 넣어 1분간 강하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후 디클로르메탄층을 무수황산나트륨 15 g에 통과시켜 감압농축플라스크에 받는 과정을 2회 반복한다. 이를 40℃ 이하에서 감압 농축하고 디클로르메탄 50 mL에 녹인 용액 중 1 mL를 취하여 40 mL의 용기에담아 2% 디에틸렌글리콜용액 0.2 mL를 넣어 질소건고한다. 여기에 pridine hydrochloride 5 g을 넣고 밀봉한 다음 220℃에서 1시간 동안 가열한 후 실온으로 냉각시키고 0.2 M 염산 20 mL를 넣어 녹인 후 분액깔때기에 옮겨 물 100 mL, 디클로르메탄 50 mL를 넣고 1분간 강하게 흔들어 층이 분리될 때까지 정치한다. 디클로르메탄층을 무수황산나트륨 15 g에 통과시켜 탈수하여 감압농축플라스크에 받는 과정을 2회 반복한다. 여기에 아세톤에 녹인 2% 디에틸렌글리콜용액 0.2 mL를 넣어 40℃ 이하에서 감압 농축한 후 아세톤 5 mL로 녹인다.
바. 시험조작
1) 기체크로마토그래프의 분석조건
가) 컬럼 : DB-5(30 m × 0.53 mm, 0.5 μm) 또는 이와 동등한 것
나) 이동상가스 및 유속 : 질소(N2), 1 mL/분
다) 주입부 온도 : 300℃
라) 오븐 온도 : 110℃
마) 검출기 온도 : 300℃
바) 주입모드 : Splitless mode
사) 주입량 : 2 μL
2) 검량선의 작성
표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.
3) 표준품의 크로마토그램
그림 1. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램 예시.
2,4,6-티시피(트리클로로페놀)(8.2분)
4) 정량한계
0.01 mg/kg
사. 정량시험위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.
아. 확인시험기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 2,4,6-TCP(trichlorophenol)를 확인한다.
1) 기체크로마토그래프-질량분석기의 분석조건
가) 컬럼 : DB-5MS(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것
나) 이동상가스 및 유속 : 헬륨(He), 1 mL/분
다) 주입부 온도 : 250℃
라) 오븐 온도 : 80℃에서 시험용액을 주입하고 5분간 유지한 후 10℃/분의 비율로 250℃까지 온도를 상승시켜 3분 이상 유지한다.
마) 인터페이스 온도 : 270℃
바) 주입모드 : Splitless mode
사) 주입량 : 1 μL
아) 분자량 범위 : 80～500m/z
자) 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온
분석성분
(Compound)
머무름 시간
(분)
분자량
(MW)
이온
(m/z)
2,4,6-티시피(트리클로로페놀)
(2,4,6-TCP(trichlorophenol))
11.9
197.5
196
시료 30 g(곡류 및 두류는 20 g)을 정밀히 달아 추출 용기에 넣고(곡류 등 건조 시료는 물 20 mL를 넣은 후 혼합하여 2시간 방치), 아세토니트릴 100 mL를 넣고 30분간 흔들어 섞어 추출한다. 이를 여과지가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인 여과하고, 잔류물을 아세토니트릴 50 mL로 씻어 내려 앞의 여과액과 합치고 아세톤에 녹인 2% 디에틸렌글리콜용액 0.2 mL를 넣어 40℃ 이하에서 감압 농축한다. 잔류물을 물 100 mL와 디클로르메탄 50 mL으로 녹여 분액깔때기에 옮기고 포화염화나트륨용액 50 mL를 넣어 1분간 강하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후 디클로르메탄층을 무수황산나트륨 15 g에 통과시켜 감압농축플라스크에 받는 과정을 2회 반복한다. 이를 40℃ 이하에서 감압 농축하고 디클로르메탄 50 mL에 녹인 용액 중 1 mL를 취하여 40 mL의 용기에담아 2% 디에틸렌글리콜용액 0.2 mL를 넣어 질소건고한다. 여기에 pridine hydrochloride 5 g을 넣고 밀봉한 다음 220℃에서 1시간 동안 가열한 후 실온으로 냉각시키고 0.2 M 염산 20 mL를 넣어 녹인 후 분액깔때기에 옮겨 물 100 mL, 디클로르메탄 50 mL를 넣고 1분간 강하게 흔들어 층이 분리될 때까지 정치한다. 디클로르메탄층을 무수황산나트륨 15 g에 통과시켜 탈수하여 감압농축플라스크에 받는 과정을 2회 반복한다. 여기에 아세톤에 녹인 2% 디에틸렌글리콜용액 0.2 mL를 넣어 40℃ 이하에서 감압 농축한 후 아세톤 5 mL로 녹인다.
표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.
0.01 mg/kg
분석성분
(Compound)
머무름 시간
(분)
분자량
(MW)
이온
(m/z)
2,4,6-티시피(트리클로로페놀)
(2,4,6-TCP(trichlorophenol))
11.9
197.5
196