7.1.3.80 디메토모르프(Dimethomorph)

가. 시험법 적용범위곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리시료를 아세토니트릴로 추출한 후 헥산으로 1차 액-액 분배 및 디클로로메탄으로 2차 액-액 분배를 한 후 플로리실 컬럼크로마토그래피로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치

1) 액체크로마토그래프-자외선흡광검출기(HPLC-UVD)

2) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액 : 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액 : 표준원액을 각각 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다. 검량용 표준용액은 아세토니트릴 : 물(40 : 60) 혼합액에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

5) 플로리실(Florisil) : 컬럼크로마토그래피용 플로리실(60～100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관하여 사용한다.

6) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 25 g을 정밀히 달아 추출 용기에 넣고(곡류 및 두류의 경우 물 20 mL 및 40 mL를 가한 후 30분간 방치) 아세토니트릴 100 mL를 넣고 10분간 강하게 흔들어 추출한다. 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인 여과한 뒤 아세토니트릴 50 mL로 잔류물 및 용기를 씻어내려 앞의 여과액과 합한 후 분액깔때기에 옮기고 물 450 mL와 포화염화나트륨용액 50 mL를 넣은 후 100 mL의 헥산을 넣어 5분간 강하게 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리시키고 하층 수용액은 별개의 분액깔때기로 옮기고 헥산층을 버린다. 수용액층에 디클로로메탄 50 mL를 넣어 5분간 강하게 흔들어 섞은 후 디클로로메탄층을 취하였다. 분액에 남은 수용액층에 다시 디클로로메탄 50 mL 를넣어 합친 디클로로메탄을 무수황산나트륨 15 g에 통과시켜 탈수하고 40℃ 이하에서 감압 농축하여 날려버리고 잔류물을 디클로로메탄 10 mL로 녹인다.

2) 정제
안지름 1.1 cm, 길이 40 cm의 유리컬럼관에 130℃에서 하룻밤 가열하여 탈수시킨 플로리실 5 g을 건식충전하고, 그 위에 무수황산나트륨 약 2 g을 건식충전한 후 디클로로메탄 25 mL를 넣어 상단에 소량의 디클로로메탄이 남을 정도로 유출시켜 버린다. 여기에 위의 디클로로메탄에 녹인 시료용액 10 mL를 가한 후 약 3 mL/분의 유속으로 흘려버리고 여분의 디클로로메탄 5 mL로 용기 및 컬럼 벽면을 씻어 유출시켜 버린다. 충전제 표면이 노출되기 직전 에틸아세테이트 : 디클로로메탄(10 : 90) 혼합액 50 mL로 유출시켜 버리고 재차 에틸아세테이트 : 디클로로메탄(25 : 75) 혼합액 60 mL를 용출하여 받는다. 이 용출액을 40℃ 이하에서 감압 농축 후 잔류물에 아세토니트릴 : 물(40 : 60) 혼합액을 넣어 최종부피가 10 mL가 되게 하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프의 분석조건

가) 컬럼 : C18(4.0 mm × 250 mm, 5.0 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 검출파장: 244 nm

다) 이동상 : 아세토니트릴과 물(40 : 60)의 혼합액

라) 이동상 유속 : 1 mL/분

마) 컬럼 온도 : 40℃

바) 주입량 : 20 μL

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

3) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 액체크로마토그래피에서 표준용액의 크로마토그램 예시.

A :E-디메토모르프(10.8분), B :Z-디메토모르프(12.4분)

4) 정량한계
0.04 mg/kg

사. 정량시험위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

아. 확인시험액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 디메토모르프를 확인한다.

1) 액체크로마토그래프-질량분석기의 분석조건

가) 컬럼 : C18(2.1 mm × 150 mm, 3.0 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상 : 0.1% 포름산 함유 아세토니트릴과 물(45 : 55)의 혼합액

다) 이동상 유속 : 0.3 mL/분

라) 컬럼 온도 : 40℃

마) 주입량 : 10 μL

바) 이온화 방법 : ESI positive-ion mode

사) 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	이온 (m/z)
E-디메토모르프 (E-dimethomorph)	4.3	387.9	387.1	388
Z-디메토모르프 (Z-dimethomorph)	4.8	387.9	387.1	388