7.1.3.83 티아페나실(Tiafenacil)
가. 시험법 적용범위곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.
나. 분석원리시료를아세토니트릴 : 물 : 아세트산 혼합액으로 추출하여 HLB 카트리지로 정제한 후 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.
다. 장치
1) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)
라. 시약 및 시액
1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급
2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것
3) 표준원액 : 티아페나실, 티아페나실 M36 및 티아페나실 M56 표준품을 각각 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.
4) 표준용액 : 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).
5) HLB 카트리지(Hydrophilic-Lipophilic Balance cartridge) : Divinylbenzene–
N-vinylpyrrolidone Copolymer(500 mg) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것
6) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급
마. 시험용액의 조제
1) 추출
시료 10 g을 정밀히 달아 추출 용기에 넣고( 곡류 및 두류의 경우 물 20 mL를 넣은 후 30분간 방치 )아세토니트릴 : 물 : 아세트산(80 : 20 : 1) 혼합액 100 mL 를넣어 10분간 강하게 흔들어 추출한다. 추출물을 여과지(Whatman, No. 2)가 깔려있는 부흐너깔때기에 통과시켜 흡인 여과하고 여과액을 감압플라스크에 받는다. 여과지 상의 추출 잔류물을 다시 수거, 아세토니트릴 : 물 : 아세트산(80 : 20 : 1) 혼합액 50 mL를 넣어 재차 10분간 흔들어 섞는다. 추출물을 재차 흡인 여과하고 아세토니트릴 20 mL로 잔류물 및 용기를 씻어내려 앞서의 여과액과 합친 뒤 40℃ 이하에서 감압 농축한다. 잔류물에 물 100 mL를 넣어 흔들어 섞은 후 분액깔때기에 옮기고 포화염화나트륨용액 50 mL를 가한 후 1 N 염산 1.0~1.5 mL를 넣어 pH 1.5~1.8로 맞춘다. 수용액에 에틸아세테이트 100 mL를 넣어 강하게 흔든 후 층이 완전히 분리될 때까지 정치하고, 에틸아세테이트층을 무수황산나트륨에 통과시켜 농축플라스크에 받는다. 수용액층에 에틸아세테이트 100 mL를 추가로 넣어 위의 과정을 반복하고 합친 분배 추출액을 40℃ 이하에서 감압 농축한 다음 잔류물에 1% 아세트산 함유 물 5 mL에 녹인다. ※ 지방성 시료의 경우 잔류물에 아세토니트릴로 포화시킨 헥산 30 mL에 녹여 분액깔때기에 옮기고 헥산으로 포화시킨 아세토니트릴 30 mL씩으로 2회 분배 추출한다. 합친 아세토니트릴층을 40℃에서 감압 농축, 용매를 완전 증발시킨 후 잔류물에 1% 아세트산 함유 물 5 mL에 녹인다.
2) 정제
HLB 카트리지에 2~3 방울/초의 속도로 메탄올 10 mL와 물 10 mL를 순차적으로 유출시켜 활성화한다. 고정상 상단이 노출되기 직전에 ‘1) 추출’로부터 얻은 추출액 5 mL를 넣어 1~2 방울/초의 속도로 유출시켜 버리고 재차 메탄올 : 물(20 : 80) 혼합액 5 mL를 넣어 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 직전에 메탄올 15 mL를 넣고 용출액을 증류 플라스크에 받은 후 40℃ 이하에서 감압 농축하여 용매를 완전 증발시킨다. 잔류물을 아세토니트릴 : 물(50 : 50) 혼합액 5 mL에 녹인 후 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과하여 시험용액으로 사용한다.
바. 시험조작
1) 액체크로마토그래프 분석조건
가) 컬럼 : C18계 역상 컬럼또는 이와 동등한 것
나) 컬럼 온도 : 40℃
다) 이동상
(1) 이동상 A : 0.1% 포름산 함유 아세토니트릴
(2) 이동상 B : 0.1% 포름산 함유 물
(3) 농도 구배 조건
시간(분) |
A(%) |
B(%) |
0.0 |
5 |
95 |
3.0 |
5 |
95 |
4.0 |
100 |
0 |
6.0 |
100 |
0 |
8.0 |
5 |
95 |
10.0 |
5 |
95 |
라) 이동상 유속 : 0.25 mL/분
마) 주입량 : 10 μL
2) 질량분석기 분석조건
가) 이온화 방법 : ESI positive-ion mode
나) Capillary voltage : 4.0 kV
다) Collision gas : 아르곤(Ar)
라) Cone voltage
(1) 티아페나실 : 40 V
(2) 티아페나실 M36 및 티아페나실 M56 : 16 V
마)액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온
분석성분 (Compound) |
분자량 (MW) |
관측질량 (Exact mass) |
선구이온 (Precursor ion,m/z) |
생성이온(Product ion,m/z) |
충돌에너지 (Collision energy, eV) |
티아페나실 (Tiafenacil) |
511.9 |
511.0 |
512 |
3811) |
28 |
480 |
26 |
||||
티아페나실 M36 (Tiafenacil M36) |
442.8 |
442.0 |
443 |
2181) |
36 |
369 |
20 |
||||
티아페나실 M56 (Tiafenacil M56) |
428.7 |
427.9 |
429 |
2181) |
34 |
355 |
20 |
1)정량이온
3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프- 질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.
4) 표준품의 크로마토그램