7.1.3.93 메타자클로르(Metazachlor)
가. 시험법 적용범위곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.
나. 분석원리시료를 아세토니트릴로 추출한 후 HLB 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.
다. 장치
1) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)
라. 시약 및 시액
1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급
2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것
3) 표준원액 : 479M04, 479M08, 479M16 표준품을 각각 메탄올에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.
4) 표준용액 : 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).
5) HLB 카트리지(Hydrophilic-Lipophilic Balance cartridge) : divinylbenzene- N- vinylpyrrolidone copolymer(500 mg) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것
6) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급
마. 시험용액의 조제
1) 추출
시료 5 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고( 곡류 및 두류 등 건조시료의 경우 물 5 mL를 넣고 10분간 방치) 아세토니트릴 25 mL를 가한 뒤(곡류와 두류의 경우 염화나트륨 4 g을 넣는다.) 1분간 강하게 흔들어 섞은 후 포름산을 이용하여 추출액의 pH를 3으로 맞춘다. 10분간 흔들어 섞은 후 4℃, 4,000 G에서 5분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다. 둥근바닥플라스크에 상층액 전량을 취한 후 아세토니트릴 25 mL를 재차 넣어 위 과정을 반복한다. 앞의 상층액과 합하여 40℃이하에서 감압 농축한 후 건고물을 메탄올 12.5 mL에 녹인다.
2) 정제
HLB 카트리지에 아세토니트릴 3 mL, 물 3 mL를 차례로 넣어 2~3 방울/초의 속도로 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘1) 추출’로부터 얻은 메탄올에 녹인 5 mL를 카트리지 상단에 넣어 1~2 방울/초의 속도로 용출하여받는다. 고정상 상단이 노출되기 전에 메탄올 5 mL를 추가로 넣어 앞서 받은 액과 합쳐 부피를 10 mL로 맞춘다. 정제된 용액을 멤브레인 필터(PVDF, 0.2 μm)로 여과한 후 시험용액으로 한다.
바. 시험조작
1) 액체크로마토그래프 분석조건
가) 컬럼 : C18계 역상 컬럼 또는 이와 동등한 것
나) 컬럼 온도 :40℃
다) 이동상
(1) 이동상 A : 메탄올
(2) 이동상 B : 5 mM 포름산 암모늄 함유 물
(3) 농도구배조건
시간(분) |
A(%) |
B(%) |
0.0 |
10 |
90 |
3.0 |
10 |
90 |
5.0 |
90 |
10 |
7.0 |
90 |
10 |
7.1 |
10 |
90 |
10.0 |
10 |
90 |
라) 이동상 유속 : 0.3 mL/분
마) 주입량 : 5 μL
2) 질량분석기 분석조건
가) 이온화 방법 : ESI positive-ion mode
나) Capillary voltage : 1.0 kV
다) Collision gas : 아르곤(Ar)
라)액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온
분석성분 (Compound) |
분자량 (MW) |
관측질량 (Exact mass) |
선구이온 (Precursor ion,m/z) |
생성이온(Product ion,m/z) |
충돌에너지 (Collision energy, eV) |
479M04 |
273.3 |
273.1 |
274 |
1341) |
18 |
162 |
7 |
||||
206 |
11 |
||||
479M08 |
323.4 |
323.0 |
324 |
1341) |
26 |
105 |
42 |
||||
256 |
11 |
||||
479M16 |
379.4 |
379.1 |
380 |
1341) |
20 |
179 |
15 |
||||
312 |
9 |
1)정량이온
3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.
4) 표준품의 크로마토그램