7.1.2.21이마자피르(Imazapyr), 이마자픽(Imazapic), 이마자메타벤즈-메틸(Imazamethabenz-methyl), 이마제타피르(Imazethapyr), 이마자목스(Imazamox), 이마자퀸(Imazaquin)

가. 시험법 적용범위곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리시료를 1% 포름산 함유 아세토니트릴로 추출한 후 d-SPE(dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치

1) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3)표준원액 : 이마자피르, 이마자픽, 이마자메타벤즈-메틸, 이마제타피르, 이마자목스 표준품은 아세토니트릴에 각각 녹이고, 이마자퀸 표준품은 메탄올에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액 : 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) d-SPE : 무수황산마그네슘(MgSO
4, anhydrous magnesium sulfate), 1차 2차 아민(PSA, Primary Secondary Amine), C18(octadecyl bonded silica)

6) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 5 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고(곡류, 두류 등 건조 시료는 물 5 mL 넣고 30분 방치) 1% 포름산 함유 아세토니트릴 20 mL를 가한 뒤 10분간 흔들어 섞은 후 추출물에 무수황산마그네슘 4 g과 염화나트륨 1 g을 넣어 1분간 흔들고 4℃, 4,000 G에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리하여 상층액 1 mL를 취한다.

2) 정제
무수황산마그네슘 150 mg, 1차 2차 아민 25 mg 및 C1825 mg이 미리 담겨져 있는 2 mL 원심분리관에 ‘1) 추출’로부터 얻은 상층액 1 mL를 넣고 30초간 와류교반기 등을 이용하여 충분히 혼합한 후 이를 원심분리 등의 방법으로 층을 분리한 후 상층액을 멤브레인 필터(Nylon, 0.2 μm)로 여과하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼 :C18계 역상 컬럼 또는 이와 동등한 것

나) 컬럼 온도 : 40℃

다) 이동상

(1) 이동상 A : 0.1% 포름산 함유 아세토니트릴

(2) 이동상 B : 0.1% 포름산 함유 물

(3) 농도구배조건

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	5	95
0.5	5	95
5.0	100	0
7.0	100	0
10.0	5	95

라) 이동상 유속 : 0.3 mL/분

마) 주입량 : 2 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법 : ESI positive-ion mode

나) Capillary voltage : 1.0 kV

다) Collision gas: 아르곤(Ar)

라)액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분 (Compound)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion,m/z)	생성이온(Product ion,m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
이마자피르 (Imazapyr)	261.2	261.1	262	1491)	25
				86	25
				69	22
이마자픽 (Imazapic)	275.3	275.1	276	2311)	19
				163	24
				248	15
이마자메타벤즈-메틸 (Imazamethabenz- methyl)	288.3	288.1	289	1441)	25
				86	19
				229	19
이마제타피르 (Imazethapyr)	289.3	289.1	290	1591)	33
				230	21
				245	20
이마자목스 (Imazamox)	305.3	305.1	306	1931)	25
				86	26
				218	26
이마자퀸 (Imazaquin)	311.3	311.1	312	1991)	25
				86	24
				267	20

1)정량이온

※ 이마자메타벤즈-메틸은 컬럼의 분리능에 따라 피크가 두 개로 분리될 경우 두 피크 면적의 합으로 정량함.

3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품의 크로마토그램