7.1.2.4 바이오레스메트린(Bioresmethrin), 사이할로트린(Cyhalothrin), 사이플루트린(Cyfluthrin), 사이퍼메트린(Cypermethrin), 펜발러레이트(Fenvalerate), 펜프로파트린(Fenpropathrin), 플루발리네이트(Fluvalinate) 및 퍼메트린(Permethrin)

가. 시험법 적용범위곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리시료를 아세톤으로 추출한 후 플로리실 카트리지로 정제하여 기체크로마토그래프로 측정한다.

다. 장치

1) 기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD)
단, 바이오레스메트린은 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)만을 사용한다.

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 플로리실 카트리지(Florisil catridge) : 플로리실(1,000 mg) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것

4) 표준원액 : 바이오레스메트린, 사이할로트린, 사이플루트린, 사이퍼메트린, 펜발러레이트, 펜프로파트린, 플루발리네이트 및 퍼메트린 표준품을 각각 아세톤에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

5) 표준용액 : 표준원액을 각각 아세톤에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

6) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 20 g을 정밀히 달아 추출 용기에 넣고(곡류, 두류 등 건조 시료는 물 20 mL를 넣고 1시간 방치) 아세톤 100 mL를 넣은 후 2～3분간 강하게 흔들어 섞어 추출한다. 이를 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인 여과하고, 잔류물을 아세톤 30 mL로 씻어 내려 상기 여과액과 합친 후 1 L 분액깔때기로 옮기고 헥산 100 mL, 포화염화나트륨 용액 50 mL 및 물 450 mL를 가한 후 1분간 강하게 흔들어 섞는다. 정치하여 층을 분리시킨 후 수용액 층을 버리고 헥산층을 무수황산나트륨에 통과시켜 탈수한다. 이액을 40℃ 이하에서 감압 농축 하여 건고시킨 후 잔류물을 헥산 10 mL에 녹인 후 4 mL를 취하여 마개가 있는 시험관(15 mL)에 옮긴 후 헥산 6 mL를 넣어 합친다. 곡류, 두류 및 고추 등 지방성 시료의 경우 상기 건고물을 헥산포화아세토니트릴 30 mL로 녹이고 250 mL 분액깔때기로 옮기고 헥산포화아세토니트릴 30 mL로 2회 분배 추출 하여 아세토니트릴층을 40℃ 이하에서 감압 농축 하여 건고시키고 헥산 10 mL에 녹인 후 4 mL 를 취하여 마개가 있는 시험관(15 mL)에 옮긴 후 헥산 6 mL를 넣어 합친다.

2) 정제
플로리실 카트리지에 헥산 5 mL를 2～3 방울/초 정도의 속도로 유출하여 활성화시킨 다음 ‘1) 추출’에서 얻은 용액을 카트리지에 넣고 1～2 방울/초 정도의 속도로 유출시켜 버린다. 여기에 디클로로메탄 : 헥산(5 : 95) 혼합액 10 mL로 씻어서 버리고 디클로로메탄 : 헥산(40 : 60) 혼합액 10 mL로 용출하여 시험관에 받는다. 용출액은 40℃ 이하에서 낮은 유속으로 질소가스를 사용하여 용매를 날려 보낸 후 즉시 이소옥탄(Isooctane) 4 mL로 녹여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프의 분석조건

가) 컬럼 : DB-5, DB-17 및 SPB-1701(30 m × 0.53 mm, 0.5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상가스 및 유속 : 헬륨(He), 15 mL/분

다) 오븐 온도 : 210℃에서 시험용액을 주입하고 40분간 유지한다.(DB-5), 230℃에서 시험용액을 주입하고 40분간 유지한다.(DB-17), 225℃에서 시험용액을 주입하고 40분간 유지한다.(SPB-1701)

라) 주입부 : Splitless

마) 주입부 온도 : 260℃

바) 검출기 온도 : 280℃

사) 주입량 : 2 μL(직접주입법)

2) 검량선의 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

3) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램(DB-5) 예시.

1 : 바이오레스메트린(18.2분), 0.1 ng, 2 : 사이할로트린(9.4분, 10.1분), 0.2 ng, 3 : 사이플루트린(16.9분, 17.8분, 18.2분, 18.6분), 0.3 ng, 4 : 사이퍼메트린(19.1분, 20.1분, 20.5분, 21.0분), 0.5 ng, 5 : 펜발러레이트(25.7분, 29.5분), 0.3 ng, 6 : 펜프로파트린(6.8분), 0.1 ng, 7 : 퍼메트린(13.0분, 13.7분), 0.3 ng, 8: 플루발리네이트(30.1분, 32.4분) 0.3 ng

4) 정량한계
바이오레스메트린(0.05 mg/kg), 사이할로트린(0.003 mg/kg), 사이플루트린(0.01 mg/kg), 사이퍼메트린(0.01 mg/kg), 펜발러레이트(0.001 mg/kg), 펜프로파트린(0.003 mg/kg), 퍼메트린(0.01 mg/kg), 플루발리네이트 (0.01 mg/kg)

5) 기체크로마토그래프-질량분석기 분석조건

가) 컬럼 : DB-5MS 캐필러리 컬럼(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상가스 및 유속 : 헬륨(He), 2 mL/분

다)오븐 온도 : 80℃에서 시험용액을 주입하고 2분간 유지한 후 25℃/분의 비율로 220℃로상승시키고 5분간 유지하고, 2℃/분의 비율로 280℃까지 상승 시킨 후 5분간 유지한다.

라) 주입부 : Splitless mode(purge time 0.9분)

마) 주입부 온도 : 260℃

바) 인터페이스 온도 : 300℃

사) 분자량 범위 : 100～400m/z

아) 주입량 : 1 μL

자) 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	이온 (m/z)
바이오레스메트린 (Bioresmethrin)	18.2	338.4	1711), 143, 128, 123, 166
사이할로트린 (Cyhalothrin)	22.1, 22.7	449.9	181, 197, 209, 141, 449
사이플루트린 (Cyfluthrin)	27.8, 28.3, 28.5, 28.7	434.3	163, 206, 226, 127
사이퍼메트린 (Cypermethrin)	29.6, 29.8, 30.0, 30.8	416.3	163, 181, 127, 209
펜발러레이트(Fenvalerate)	32.8, 33.8	419.9	125, 167, 152, 181, 225, 419
펜프로파트린 (Fenpropathrin)	20.0	349.4	181, 265, 125, 141, 208
퍼메트린 (Permethrin)	25.5, 26.1	391.3	183, 163, 127, 115
플루발리네이트 (Fluvalinate)	33.6, 34.0	502.9	250, 181, 208, 152, 502, 234

1)정량 이온

사. 정성시험위의 조건에서 시험할 때 시험결과는 어느 분석조건에서도 표준품과 일치하여야 한다. (기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간(retention time) 및 질량분석 스펙트럼으로 각 농약의 성분을 확인할 수 있다.)

아. 정량시험정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크 높이법 또는 피크 면적법에 따라 정량한다.