7.2.2.5 이미녹타딘(Iminoctadine)

가. 시험법 적용범위수삼, 건삼, 홍삼, 인삼농축액, 홍삼농축액 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리시료를 메탄올로 추출한 후 유도체화 시켜 실리카 컬럼크로마토그래피로 정제하여 기체크로마토그래프로 측정한다.

다. 장치

1) 기체크로마토그래프-질소․인 검출기(GC-NPD)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 물

3) 실리카(silica) : 컬럼크로마토그래피용

4) 유도체화 시약 : 1,1,1,5,5,5-hexafluoro-2,4-pentadion 및 무수트리플루오로초산(anhydrous trifluoroacetate)

5) 표준원액 : 표준품(Iminoctadine triacetate)을 메탄올에 녹여 50 mg/L가 되게 한다.

6) 표준용액 : 표준원액 1 mL를 취하여 플라스크에 넣고 실온에서 질소를 통과하면서 증발건고시킨 후 마. 시험용액의 조제 2) 유도체화에 따라 실험하고 헥산으로 희석하여 적절한 농도(0.1～2 mg/L)로 희석하여 사용한다.

7) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료(수삼 40 g, 건조삼 10 g, 인삼농축액 5 g)를 정밀히 달아 시료 10 g 당 5 g에 해당하는 염산구아니딘(guanidine hydrochloride)을 넣고 섞은 후 분액깔때기에 옮기고 2 N 수산화나트륨 및 메탄올 100 mL를 넣고 30분간 흔들어 섞은 후 감압 여과한다. 잔류물은 다시 분액깔때기에 옮기고 이에 2 N 수산화나트륨 및 메탄올 50 mL를 넣고 위와 같이 되풀이하여 여과액을 합쳐 분액깔때기에 옮기고 물 150 mL 및 클로로포름 100 mL를 넣고 5분간 강하게 흔들어 섞은 후 정치하여 클로로포름층을 분리한다. 물층에 다시 클로로포름 100 mL를 넣고 위와 같이 2회 되풀이한 후 클로로포름층을 농축기용 둥근바닥플라스크에 모아 이에 0.1 N 황산 50 mL를 넣어 섞고 40℃ 이하에서 용매를 날려버리고 물층을 분액깔때기에 옮긴다. 다시 둥근바닥플라스크를 물 150 mL 및 클로로포름 100 mL로 잘 씻고 이 씻은 액은 분액깔때기에 합쳐 5분간 강하게 흔들어 섞고 방치하여 층을 분리하고 물층을 500 mL의 플라스크에 옮긴다. 이를 50℃ 이하에서 감압 농축하여 약 10 mL로 농축하여 50 mL의 둥근바닥플라스크에 옮기고 위의 플라스크를 소량의 물로 씻어 50 mL의 둥근바닥플라스크에 합쳐 이를 50℃ 이하에서 감압 농축하여 약 0.5 mL 정도로 농축한다. 이 농축액에 이산화탄소의 발생이 정지될 때까지 포화탄산수소나트륨 몇 방울을 넣는다.

2) 유도체화
위의 용액에 포화탄산나트륨용액 0.2 mL, 톨루엔 5 mL 및 1, 1, 1, 5, 5, 5-hexafluoro-2, 4 pentadion 0.5 mL를 넣고 마개를 하여 때때로 흔들면서 90℃에서 4시간 방치하고 냉각한 후 5% 탄산수소나트륨용액 5 mL를 넣고 흔들어 섞어 100 mL의 분액깔때기에 옮기고 둥근바닥플라스크를 헥산 20 mL로 씻어 분액깔때기에 합쳐 5분간 강하게 흔들어 섞고 정치하여 층을 분리한다. 물층에 다시 헥산 20 mL를 넣고 위와 같이 되풀이하여 전 헥산층을 합하여 액상분리여과지로 100 mL의 플라스크에 탈수, 여과한다. 이에 무수트리플루오로초산(anhydrous trifluoroacetate) 0.2 mL를 넣고 마개를 하여 때때로 흔들면서 25℃에서 6시간 방치한 후 이 용액에 물 10 mL 및 5% 탄산수소나트륨용액 5 mL를 사용하여 분액깔때기에 옮기고 5분간 강하게 흔들어 섞은 후 방치하여 헥산층을 분리하고 물층에 다시 헥산 20 mL를 넣고 위와 같이 되풀이한 후 헥산층을 모아 액상분리용 여과지를 사용하여 100 mL의 둥근바닥플라스크에 탈수, 여과하고 이를 40℃ 이하에서 감압 농축하여 용매를 완전히 날려버리고 잔류물을 에틸아세테이트 : 헥산(5 : 95) 혼합액 10 mL에 녹인다.

3) 정제
안지름 15 mm의 컬럼관에 에틸아세테이트 : 헥산(5 : 95)의 혼합액을 사용하여 실리카 10 g 및 무수황산나트륨 5 g을 차례로 충전하고 용매를 무수황산나트륨층까지 유출시켜 버리고 위의 ‘2) 유도체화’에서 얻은 용액을 넣어 유출시킨 후 에틸아세테이트 : 헥산(5 : 95) 혼합액 100 mL를 넣어 초기의 용출액 20 mL는 버리고 이후 용출액 80 mL를 모아 40℃ 이하에서 감압 농축하여 용매를 완전히 날려버리고 잔류물을 헥산에 녹여 일정량으로 하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프의 분석조건

가) 컬럼 : DB-17(5 m × 0.53 mm × 1.0 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상가스 및 유속 : 질소(N2), 5 mL/분

다) 오븐 온도 : 100℃에서 시험용액을 주입하고 1분간 유지한 후 30℃/분의 비율로 280℃까지 온도를 상승시켜 10분 이상 유지한다.

라) 주입부 온도 : 250℃

마) 검출기 온도 : 280℃

2) 검량선의 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

3) 정량한계
0.05 mg/kg

사. 정성시험위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 어느 분석조건에서도 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

아. 정량시험정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크높이법 또는 피크면적법에 따라 정량한다.