7.3.2.5 글리포세이트(Glyphosate)

가. 시험법의 적용범위

소고기, 돼지고기, 가금류고기, 유, 알 등 축산물에 적용한다.

나. 분석원리시료를 1% 포름산 함유 용액으로 추출하여 HLB 카트리지로 정제한 후 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치

1) 액체크로마토그래프 : 질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액 : 글리포세이트와 대사산물인 N-아세틸글리포세이트 표준품을 1% 포름산 함유 용액에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액 : 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급

6) 특이사항 : 글리포세이트는 유리 벽면에 흡착할 가능성이 있으므로 모든 시험과정에서 폴리프로필렌 재질의 용기를 사용한다.

마. 시험용액의 조제

1) 추출
균질화한 시료 5 g을 정밀히 달아 원심분리관에 넣고 1% 포름산 용액 5 mL과 아세토니트릴 15 mL을 넣고 1분간 강하게 흔들어 추출한 후 여과지(Whatman 6)로 여과 후 아세토니트릴 10 mL로 여과지를 씻어준다(추출액이 여과지를 통과하지 못하는 경우는 10,000 G이상으로 원심분리 후 상층액 전량을 취한다). 이후 40℃ 이하에서 질소가스를 사용하여 유기용매층을 증발시키고 물층만을 남긴 후 1% 포름산 함유 용액으로 10 mL 정용한다.

2) 정제
HLB 카트리지(200 mg)를 0.1% 포름산 함유 용액 6 mL로 활성화한 후, ‘1) 추출’로부터 얻은 추출물 2 mL을 카트리지에 넣고 용출하여 받는다. 카트리지 상단이 마르기 전에 0.1% 포름산 함유 용액 2 mL을 용출하여 앞서 받은 추출액과 합하여 4 mL로 만들고 멤브레인필터(nylon, 0.2 μm)로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프의 분석조건

가) 컬럼 : 용매 피크의 용리 시간이 1분 이내이면서 글리포세이트와N-아세틸글리포세이트의 머무름 시간이 1.5분 이상 분리 가능한 컬럼

나) 컬럼 온도 : 35℃

다) 이동상

(1) 이동상 A : 0.1% 포름산 함유 물

(2) 이동상 B : 0.1% 포름산 함유 메탄올

(3) 농도구배조건

시간(분)	A (%)	B (%)
0.0	90.0	10.0
5.0	10.0	90.0
6.0	10.0	90.0
7.0	90.0	10.0
10.0	90.0	10.0

라) 이동상 유속 : 0.25 mL/분

마) 주입량 : 5 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법 : ESI negative-ion mode

나) Capillary voltage : 3.5 kV

다) Collision gas : 아르곤(Ar) 또는 질소(N2)라) 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분 (Compound)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion,m/z)	생성이온 (Product ion,m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
글리포세이트 (Glyphosate)	169.1	168.1	168	631)	3
				150	9
N-아세틸글리포세이트 (N-acetyl glyphosate)	211.1	209.8	210	1501)	7
				124	5

1)정량이온

3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

4) 표준품의 크로마토그램