7.3.2.10 스피네토람(Spinetoram)
가.시험법 적용범위소고기, 돼지고기, 가금류고기, 유, 알 등 축산물에 적용한다.
나.분석원리시료를 아세토니트릴로 추출한 후d-SPE(dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여액체크로마토그래프로 분석한다.
다.장치
1) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)
라.시약 및 시액
1) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 특급
2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것
3) 표준원액 : 표준품을 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.
4)표준용액 : 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.
5)d-SPE : 1차 2차 아민(PSA, Primary Secondary Amine)
6) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급
마.시험용액의 조제균질화한 시료 5 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 취하여 아세토니트릴 20 mL를넣고 5분간흔들어 섞은 후.추출물을 4℃, 3000G에서 5분간 원심분리하고 상층액을 취해 새로운 원심분리관에 옮긴다. 남아있는 시료에 아세토니트릴 20 mL를 추가로넣어5분간 강하게 흔들어 섞고, 추출물을 4℃, 3000G에서 원심분리한 후 상층액을 취해 앞의 상층액과 합친다. 합친 용액에 아세토니트릴을넣어50 mL로 정용한 뒤, 상층액 20 mL를 1차 2차 아민 500 mg이 미리 담겨져 있는 50 mL 원심분리관에 옮겨 2분간 강하게 흔들고 이를 4℃, 3000G에서 5분간 원심분리한다. 정제된 상층액 중 10 mL를 취하여 40℃이하에서감압 농축하여 용매를 모두 날려버린 다음 2 mM 아세트산암모늄 함유메탄올 : 아세토니트릴(50 : 50) 혼합액을넣어최종부피가 2 mL가 되게 한 뒤 멤브레인 필터로 여과한 후 시험용액으로 한다.
바.시험조작
1) 액체크로마토그래프 분석조건
가)컬럼 : C18(2.1 mm × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것
나)컬럼 온도 : 40℃
다) 이동상
(1) 이동상 A : 2 mM 아세트산암모늄 함유 물
(2) 이동상 B : 2 mM 아세트산암모늄 함유
메탄올과 아세토니트릴(50 : 50)의 혼합액
(3) 농도구배조건
시간(분) |
A(%) |
B(%) |
0.0 |
30 |
70 |
1.0 |
30 |
70 |
5.0 |
0 |
100 |
8.0 |
0 |
100 |
10.0 |
30 |
70 |
15.0 |
30 |
70 |
라) 이동상 유속 : 0.2 mL/분
마) 주입량 : 5 μL
2) 질량분석기 분석조건
가) 이온화 : ESI positive-ion mode
나) Capillary temperature : 350℃
다) Capillary voltage : 4.5 kV
라) Collision gas : 아르곤(Ar)
분석성분 (Compound) |
선구이온 (Precursor ion,m/z) |
생성이온(Product ion,m/z) |
충돌에너지 (Collision energy, eV) |
스피네토람-J형 (Spinetoram-J) |
749 |
98 |
40 |
1421) |
30 |
||
스피네토람-L형 (Spinetoram-L) |
761 |
98 |
40 |
1421) |
30 |
1)정량이온
3) 검량선 작성
표준용액을 아세토니트릴에 일정 농도로 희석한 다음 시료에 주입하고 시험용액의 조제과정에 따라 시험한 후, 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입한다. 두 이온의 피크 높이 또는 면적의 합을 구하여 검량선(matrix matched calibration curve)을 작성한다.
4) 표준품의 크로마토그램