8.3.19폭심(Phoxim)
1) 시험법 적용범위
축산물에 적용한다.
2) 분석원리
시료중 폭심을 아세토니트릴 추출하고 SPE 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프/질량 분석기로 분석한다.
3) 장치
액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)
4) 시약 및 시액
가) 용매: 고속액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것
나) 물: 3차 증류수 또는 이와 동등한 것
다) 표준원액: 표준품을 메탄올에 녹여 조제한 용액을 표준원액으로 한다.
라) 표준용액: 표준원액을잔류허용기준 또는 검출에 적합한 농도가 되도록메탄올로 희석하여 사용한다.
마) 0.1%포름산 수용액:1 L 용량 플라스크에 일정량의 물을 넣고 포름산 1 mL 넣은 후, 최종 표시선까지 물로 채운다.
바) Silica 카트리지(6 mL, 500 mg) 또는 이와 동등한 것
사) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것
5) 시험용액의 조제
균질화한 시료 5 g을 원심분리관에 취하고 아세토니트릴 20 mL를 넣어 200 G로 20분간 흔들어 섞어 추출 한다. 원심분리기로 7℃에서 5,000 G로 5분간 원심분리 후 상층액을 취한 다음, 다시 아세토니트릴 20 mL를 넣어다시 추출한다. 모은 상층액 40 mL를 감압(또는 질소) 농축하고 잔류물을 n-헥산 5 mL로 2번 녹인 뒤 ,미리n-헥산 10 mL로 활성화한 실리카카트리지(6 mL, 500 mg)에 넣는다. 이어서 카트리지에 디클로로메탄 20 mL로 용출하여 받은 뒤 40℃ 이하에서 질소 농축한 후 잔류물을 아세토니트릴 500 μL로 녹인다. 이 시료 용액을 멤브레인필터로 여과한 후 2 mL 갈색 바이알(Vial)에 옮겨 분석 전까지 –4℃ 이하의 냉장고에 보관하고, 이를 시험용액으로 한다.
6) 시험조작
가) 액체크로마토그래프 측정조건
(1) 컬럼:C18(2.1 mm × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것
(2) 컬럼온도: 25℃
(3) 이동상
(가) 이동상 A: 0.1%포름산 수용액
(나) 이동상 B: 아세토니트릴
시간(분) |
이동상 A(%) |
이동상 B(%) |
0.0 |
60 |
40 |
2.0 |
10 |
90 |
10.0 |
10 |
90 |
10.1 |
60 |
40 |
20.0 |
60 |
40 |
(4) 유속: 0.3 mL/분
(5) 주입량: 10 μL
나) 질량분석기 측정조건
(1) Ionizationmode: ESI(positive)
(2) Capillary temperature: 350℃
(3) Collision energy: 3 eV
(4) 분석대상물질의 조건
물질명 (Compound) |
머무름 시간 (분) |
이온화 (Ionization mode) |
관측질량 (Exact mass) |
선구이온 (Precursor ion,m/z) |
생성이온 (Product ion,m/z) |
충돌 에너지 (Collision energy) |
폭심 (Phoxim) |
6.0 |
Positive |
298.1 |
299 |
129 77 97 |
3 |
※ 밑줄 표시되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임
7) 정성 및 확인
가) 정성 및 확인
위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(precursor ion) 및 생성이온(product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(ion ratio)을 비교하여 그 비율은 주1)과 일치하여야 한다. 확인시험의 경우, 음성시료
(blank sample)에 해당 물질을 넣은 것을 시료와 동일하게 전처리하여 얻은 표준용액 으로서 비교한다.
주1)생성이온간 반응세기의 비율 허용범위
이온간 반응세기의 비율 (Base peak에 대한 %) |
허용범위 |
> 50% |
± 20% |
> 20%, ≤ 50% |
± 25% |
> 10%, ≤ 20% |
± 30% |
가)표준품 크로마토그램