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▶ 제 8. 일반시험법 ▶ 8. 식품 중 잔류동물용의약품시험법 ▶ 8.3 정량시험법 ▶ 8.3.31 플로르페니콜(Florfenicol)
  • 8.3.31플로르페니콜(Florfenicol)

    1) 시험법 적용범위

    축·수산물 등에 적용한다.

    2) 분석원리

    시료중 플로르페니콜과 플로르페니콜아민을 암모니아수(ammonia water), 아세토니트릴로 추출하고 PSA, C18, MgSO4으로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

    3) 측정기기

    액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

    4) 시약 및 시액

    가) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

    나) 물: 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

    다) 표준원액: 표준품을 아세토니트릴에녹여 조제한 용액을 표준원액으로 한다.

    라) 표준용액: 표준원액을잔류허용기준 또는 검출에 적합한 농도가 되도록아세토니트릴로 희석하여 사용한다.

    마) 0.1%포름산 수용액: 1,000 mL 용량플라스크에포름산(formic acid) 1 mL를 넣고 물로표시선까지 채운다.

    바) 0.1%포름산 함유 메탄올: 1,000 mL 용량플라스크에포름산1 mL를 넣고 메탄올로 표시선까지 채운다.

    사) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

    5) 첨가시료의 조제

    조직표준곡선(tissue standard curve) 작성을 위하여 각 해당 물질이 검출되지 않은 음성시료(blank sample) 2 g씩 준비한 후음성시료(blank sample)를 포함하여 5개 이상의 농도로 전처리하여 표준용액을 제조한다.

    6) 시험용액의 조제

    균질화한시료2 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 취한다. 아세토니트릴 10 mL와 암모니아수 100 μL를넣고10분간흔들어 섞은 후4,700G, 4℃에서 10분간 원심분리한다. 원심분리한 상층액을 모두 취하여 PSA 150 mg, C18150 mg과 MgSO4900 mg가담겨진 50 mL 원심분리관에 옮기고 1분간흔들어 섞은 후4,700G, 4℃에서 10분간 원심분리한다. 원심분리한 상층액 중 5 mL를 취하여40℃ 이하에서 질소 농축한다. 잔류물에 아세토니트릴:물(30:70, v/v) 혼합용액 1 mL를넣어 녹이고,0.2 μm PTFE (polytetrafluoroethylene) 멤브레인필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

    7) 시험조작

    가) 액체크로마토그래프 측정조건

    (1)컬럼: C18(2.1 mm ⨯150 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

    (2) 이동상

    (가) 이동상 A: 0.1%포름산 수용액

    (나) 이동상 B: 0.1%포름산 함유 메탄올

    시간(분)

    이동상 A(%)

    이동상 B(%)

    1.0

    90

    10

    3.0

    10

    90

    5.0

    10

    90

    5.1

    90

    10

    10.0

    90

    10

    (3) 유속: 0.25 mL/분

    (4)컬럼온도: 40℃

    (5) 주입량: 5 μL

    나) 질량분석기 조건

    (1) Ionizationmode: ESI(positive, negative)

    (2) Capillary temperature: 350℃

    (3) Capillary voltage: 3.8 kV

    (4) Collision gas: Ar(아르곤)

    (5) 분석대상물질의 개별조건

    연번

    물질명

    (Compound)

    머무름

    시간

    (분)

    이온화

    (Ionization

    mode)

    관측질량

    (Exact mass)

    선구이온

    (Precursor ion,m/z)

    생성이온

    (Product

    ion,m/z)

    충돌에너지

    (Collision energy, eV)

    1

    플로르페니콜

    (Florfenicol)

    4.23

    Negative

    357.0

    356.0

    336

    10

    185

    16

    152

    19

    2

    플로르페니콜 아민

    (Florfenicol amine)

    1.75

    Positive

    247.1

    248.0

    230

    11

    130

    21

    91

    48

    ※밑줄 표시되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

    8) 정성시험

    가) 정성 및 확인

    위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(precursor ion) 및 생성이온(product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의비율(ion ratio)을 비교하여 그 비율은 주1)과 일치하여야 한다.
    확인시험의 경우, 음성시료 (blank sample)에 해당 물질을 넣은 것을 시료와 동일하게 전처리하여 얻은 표준용액으로서 비교한다.

    주1)생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

    이온간 반응세기의 비율

    (Base peak에 대한 %)

    허용범위

    > 50%

    ± 20%

    > 20%, ≤ 50%

    ± 25%

    > 10%, ≤ 20%

    ± 30%

    나) 표준품 크로마토그램

    플로르페니콜