8.3.42 티오파네이트(Thiophanate)

1) 시험법 적용범위

축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

시료중 분석대상물질을 삼불화초산 함유 아세토니트릴과 황산마그네슘, 염화나트륨, 시트르산나트륨, 시트르산수소나트륨으로 추출하고 C18과 황산마그네슘을 이용한 분산고체상추출법(dSPE, dispersive solid phase extraction)으로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물: 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액: 표준품을 메탄올에 녹여 조제한 용액을 표준원액으로 한다.

라) 표준용액: 표준원액을잔류허용기준 또는 검출에 적합한 농도가 되도록메탄올로 희석하여 사용한다.

마) 0.1%삼불화초산(trifluoroacetic acid, TFA) 함유아세토니트릴: 1000 mL 용량플라스크에삼불화초산 1 mL를 넣고 아세토니트릴로 표시선까지 채운다.

바) 0.2%포름산(formic acid) 수용액: 1,000 mL 용량플라스크에포름산2 mL를 넣고 물로 표시선까지 채운다.

사) 10 mM포름산암모늄(ammonium formate) 수용액:1,000 mL 용량플라스크에포름산암모늄 0.63 g을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

아) 10 mM포름산암모늄 함유 메탄올:1,000 mL 용량플라스크에포름산암모늄 0.63 g을 넣고 메탄올로 표시선까지 채운다.

자) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화한 시료5 g을 50 mL 원심분리관에 취하고 0.1% 삼불화초산함유아세토니트릴20 mL를넣은 후5분간흔들어 섞는다.염화나트륨 1 g, 황산마그네슘 4 g, 시트르산나트륨1 g, 시트르산수소나트륨 0.5 g을 넣고 5분간흔들어 섞은 후,4℃, 2,600G에서 15분간원심분리하고 상층액을 취하여50℃ 이하에서10 mL가 되도록질소농축한다. 여기에 C18150 mg과황산마그네슘 900 mg을 넣어 5분간흔들어 섞은 후4℃, 2,600G에서 15분간 원심분리한다.상층액을 취하여50℃ 이하에서질소 농축한 후 이동상A 0.5 mL와 이동상B 0.5 mL에 녹여4℃, 15,000G에서 10분간 원심분리한 후,0.45 μm PTFE (polytetrafluoroethylene) 멤브레인필터로 여과시킨 것을 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1)컬럼: C18(2.1 mm × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A:0.2% 포름산 수용액:10 mM 포름산암모늄 수용액(1:1, v/v) 혼합용액

(나) 이동상 B:0.2% 포름산 수용액:10 mM 포름산암모늄 함유 메탄올(1:1, v/v) 혼합용액

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	100	0
5	100	0
10	0	100
25	0	100
26	100	0
35	100	0

(3) 유속: 0.2 mL/분

(4)컬럼온도: 30℃

(5) 주입량: 10 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionizationmode: ESI(positive)

(2) Capillary temperature: 350℃

(3) Collision gas: N2(질소)

(4)분석대상물질의 조건

물질명 (Compound)	머무름 시간 (분)	이온화 (Ionization mode)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precusor ion,m/z)	생성이온 (Product ion,m/z)	충돌에너지 (Collisionenergy, eV)
티오파네이트 (Thiophanate)	15.04	Positive	370.1	371.0	151	33
					93	97
					118	97

※ 밑줄 표시되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

7) 정성시험

가) 정성 및 확인

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(precursor ion) 및 생성이온(product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(ion ratio)을 비교하여그 비율은 주1)과 일치하여야 한다. 확인시험의 경우, 음성시료
(blank sample)에 해당 물질을 넣은 것을 시료와 동일하게 전처리하여 얻은 표준용액 으로서 비교한다.

주1)생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율 (Base peak에 대한 %)	허용범위
> 50%	± 20%
> 20%, ≤ 50%	± 25%
> 10%, ≤ 20%	± 30%

나) 표준품 크로마토그램