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▶ 제 8. 일반시험법 ▶ 8. 식품 중 잔류동물용의약품시험법 ▶ 8.3 정량시험법 ▶ 8.3.45 푸마길린(Fumagillin)
  • 8.3.45 푸마길린(Fumagillin)

    1) 시험법 적용범위

    꿀등에 적용한다.

    2) 분석원리

    시료중 분석대상물질을물로추출하고 Strata-X 카트리지로정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

    3) 장치

    액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

    4) 시약 및 시액

    가) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

    나) 물: 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

    다) 표준원액: 표준품을 메탄올에 녹여 조제한 용액을 표준원액으로 한다.

    라) 표준용액: 표준원액을잔류허용기준 또는 검출에 적합한 농도가 되도록아세토니트릴로 희석하여 사용한다.

    마) Strata-X 카트리지: 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(6 mL, 200 mg) 또는 이와동등한 것

    바) 0.1%포름산(formic acid) 수용액: 1,000 mL 용량플라스크에포름산1 mL를 넣고 물로 표시선까지 채운다.

    사) 0.1%포름산 함유메탄올: 1,000 mL 용량플라스크에포름산1 mL를 넣고 메탄올로표시선까지 채운다.

    아) 10 mM포름산암모늄(ammonium formate) 수용액: 1,000 mL 용량플라스크에포름산암모늄 0.63 g을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

    자) 10 mM포름산암모늄 함유 메탄올: 1,000 mL 용량플라스크에포름산암모늄 0.63 g을 넣고 메탄올로 표시선까지 채운다.

    차) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

    5) 시험용액의 조제

    균질화한 시료5 g을 50 mL 원심분리관에 취하고 물 10 mL를넣고10분간흔들어 섞은후4℃, 2,600G에서 15분간 원심분리한다. 미리 메탄올 5 mL과 물 5 mL로 Strata-X카트리지를 활성화시킨 후 추출액을 흡착시키고 40% 메탄올 5 mL로 2회유출시켜 버린다.새로운 원심분리관에 0.1%포름산함유 아세토니트릴 6 mL로용출하여 받은 후,40℃이하에서 질소농축한다. 잔류물을 0.1%포름산수용액:10 mM포름산암모늄 함유 메탄올(1:1, v/v)혼합용액1 mL로녹이고1분간흔들어 섞은 후4℃, 15,000G에서 10분간 원심분리하고0.2 μm PTFE (polytetrafluoroethylene) 멤브레인필터로 여과한 것을 시험용액으로 한다.

    6) 시험조작

    가) 액체크로마토그래프 측정조건

    (1)컬럼: C18(2.0 mm × 100 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

    (2) 이동상

    (가) 이동상 A:0.1% 포름산 수용액:10mM 포름산암모늄 수용액(1:1, v/v) 혼합용액

    (나) 이동상 B:0.1% 포름산 수용액:10mM 포름산암모늄 함유 메탄올(1:1, v/v) 혼합용액

    시간(분)

    이동상 A(%)

    이동상 B(%)

    0

    95

    5

    5

    95

    5

    10

    5

    95

    20

    5

    95

    25

    95

    5

    30

    95

    5

    (3) 유속: 0.2 mL/분

    (4) 컬럼 온도: 35℃

    (5) 주입량: 10 μL

    나) 질량분석기 조건

    (1) Ionization mode: ESI(positive)

    (2) Capillary temperature: 350℃

    (3) Collision gas: N2(질소)

    (4)분석대상물질의 조건

    물질명

    (Compound)

    머무름 시간

    (분)

    이온화

    (Ionization mode)

    관측질량

    (Exact mass)

    선구이온

    (Precusor

    ion,m/z)

    생성이온

    (Product

    ion,m/z)

    충돌에너지

    (Collision energy, eV)

    푸마길린

    (Fumagillin)

    16.62

    Positive

    458.2

    459

    131

    41

    177

    21

    103

    83

    ※ 밑줄 표시되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

    7) 정성시험

    가) 정성 및 확인

    위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(precursor ion) 및 생성이온(product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(ion ratio)을 비교하여그 비율은 주1)과 일치하여야 한다. 확인시험의 경우, 음성시료
    (blank sample)에 해당 물질을 넣은 것을 시료와 동일하게 전처리하여 얻은 표준용액 으로서 비교한다.

    주1)생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

    이온간 반응세기의 비율

    (Base peak에 대한 %)

    허용범위

    > 50%

    ± 20%

    > 20%, ≤ 50%

    ± 25%

    > 10%, ≤ 20%

    ± 30%

    나) 표준품 크로마토그램