글루코만난

Glucomannan

 

이  명: Konjac glucomannan

INS No.: 425

 

정    의  이 품목은 천남성과 곤약(Amorphophallus konja)의 뿌리줄기에 함유된 다당류로 이소프로필알콜로 정제하고 분쇄한 것으로 포도당 및 만노스로 구성된 혼합물이다.

함    량  이 품목은 건조물로서 글루코만난 90.0% 이상을 함유한다.

성    상  이 품목은 백～엷은 황색의 분말이다.

확인시험  (1) 이 품목 6g을 500mL 비이커에 넣고 이소프로필알콜 10mL로 적신 다음 즉시 교반하면서 물 200mL를 가하고 잘 교반한 후 1시간 방치하면 팽윤하여 점조한 용액이 된다.

  (2) (1)의 점조한 액에 5% 수산화칼슘용액 200mL를 가하여 잘 혼합한 다음 방치하면 겔이 형성된다.

순도시험  (1) 비소 : 이 품목을 비소시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 4.0ppm 이하이어야 한다.

  (2) 납 : 이 품목 5.0g을 취하여 원자흡광광도법 또는 유도결합플라즈마발광광도법에 따라 시험할 때, 그 양은 2.0ppm 이하이어야 한다.

  (3) 이소프로필알콜 : 이 품목은 5g을 정밀히 달아 목의 크기가 24/40의 1,000mL의 환저플라스크에 넣고 이에 항기포제(Dow—Corning G—10 또는 이와 동등한 것) 1mL, 물 200mL를 가해준 다음 1시간 동안 교반하여 준다. 이어서 이에 400mm의 환류냉각기, 증류두 및 수기를 부착시키고 기포가 수기에 들어가지 않도록 조절하고 증류액을 약 95mL정도 받고, 내부표준용액 4mL를 가한 다음 물을 가하여 100mL로 한 것을 시험용액으로 한다. 시험용액과 혼합표준용액 각각 일정량을 가스크로마토그래피에 주입하고, 다음 계산식에 따라 이소프로필알콜의 양을 구할 때, 그 양은 500ppm 이하이어야 한다. 다만, 반응계수 f는 혼합표준용액 중의 이소프로필알콜 피크면적과 tert-부틸알콜 피크면적비인 A_IPA/A_TBA에 의하여 구한다.

 

이소프로필알콜의 함량(ppm) =	AIPA × 4,000
	f × ATBA × 검체의 채취량(g)

 

A_IPA : 시험용액 중의 이소프로필알콜 피크면적

A_TBA : 시험용액 중의 tert-부틸알콜 피크면적
 

  조작조건

    칼      럼 : 3.2mm × 1.8m의 스테인레스관

    칼럼충전제 : 80～100 메쉬의 Porapak QS(또는 이와 동등한 것)

    검  출  기 : 수소염이온화 검출기(FID)

    주입구온도 : 200℃

    칼럼온도 : 165℃

    검출기온도 : 200℃

    캐리어가스 및 유량 : 질소, 이소프로필알콜이 2분, tert-부틸알콜이 3분에 검출되도록 유량을 조절한다.

  시   액

    혼합표준용액 : IPA표준용액 4mL와 TBA표준용액 4mL를 정확히 취하고 이에 물을 가하여 100mL로 한 것을 혼합표준용액으로 한다. 이 액 1mL는 이소프로필알콜과 tert-부틸알콜을 각각 약 40μg씩을 함유한다.

    IPA표준용액 : 이소프로필알콜(크로마토그래피용) 약 500mg을 정밀히 달은 다음 물을 가하여 50mL로 하고 이 액 10mL를 취하여 물을 가하여 100mL로 한다.

    TBA표준용액 : tert-부틸알콜(크로마토그래피용) 약 500mg을 정밀히 달은 다음 물을 가하여 50mL로 하고 이 액 10mL를 취하여 물을 가하여 100mL로 한다.

  (4) 점도 : 이 품목 1% 수용액을 만들어 점도측정법 중 제 2법 회전식 점도측정법에 따라 시험할 때, 500cps 이상이어야 한다.

  (5) 살모넬라 : 이 품목은 「식품의 기준 및 규격」 일반시험법의 미생물시험법 중 살모넬라에 따라 시험할 때, 음성(-)이어야 한다.

  (6) 대장균 : 이 품목은 「식품의 기준 및 규격」 일반시험법의 미생물시험법 중 대장균에 따라 시험할 때, 음성(-)이어야 한다.

건조감량  이 품목을 105℃에서 3시간 건조할 때, 그 감량은 15% 이하이어야 한다.

회    분  이 품목을 회분시험법에 따라 시험할 때, 그 양은 4% 이하이어야 한다.

정량법  이 품목 0.5～1.0g(필요한 경우는 에테르 등으로 탈지한다)씩 동일한 무게로 2개 달은 다음 2개의 400mL 비이커에 각각 취하고 각각에 인산완충액(pH 6.0) 50mL씩을 가해준다. 이 때 pH를 확인해 보고 필요한 경우 pH 6.0±0.2로 조절한다. 텀아밀용액 0.1mL를 가해주고 알루미늄박을 뚜껑으로 한 후 끓는 수욕조에서 5분마다 흔들어 주며 30분간 가열한다. 이 때 온도계를 사용하여 비이커의 내부온도를 85～100℃범위에서 15분간 유지시킨다. 이를 식힌 다음 0.275N 수산화나트륨용액 10mL를 가해주고 pH를 7.5±0.2로 조절한다. 프로테아제 5mg(또는 프로테아제 50mg을 물 1mL에 녹인 액 0.1mL)을 가해주고 알루미늄박을 뚜껑으로 한 후 계속 흔들어주며 60℃에서 30분간 항온 시킨다. 다시 이를 식힌 후 이에 0.325M 염산 10mL를 가하여 pH를 4.0～4.6으로 조절한 다음 아밀로글루코시다아제 0.3mL를 가해주고 알루미늄박을 뚜껑으로 한 후 계속 흔들어 주면서 60℃에서 30분간 항온시킨다. 95% 에탄올 280mL를 60℃로 가온하여 가한 후 잘 흔들어 혼합한 다음 상온에서 1시간 방치하여 글루코만난을 침전시킨다. 미리 무게를 달아둔 셀라이트가 함유된 유리여과기에 78% 에탄올을 가하여 적시고 셀라이트를 고르게 한 다음 흡인여과하여 셀라이트를 고르게 해주고 계속 흡인여과하며 효소처리한 검액을 이에 옮겨 여과한다. 잔사는 78% 에탄올 20mL씩 3회, 95% 에탄올 20mL씩 2회, 그리고 아세톤 10mL씩 2회 사용하여 차례로 세척한다. 피막이 형성된 경우 시약스푼으로 피막을 파괴하여 여과를 용이하게 해주고, 여과도중 간간히 여과를 중단하면 시간을 단축시킬 수 있다. 여과기는 105±5℃에서 하룻밤 건조한 다음 데시케이타에서 식히고 평량한 후에 여과기의 무게를 뺀 값을 잔사의 무게로 한다. 1개의 여과기 잔류물에 대해서는 단백질량을 구한다(단백질 계수 : 6.25). 또 다른 여과기 잔류물은 525℃에서 5시간 회화시켜 회분량을 구한다. 따로, 검체를 제외한 공시험을 행하고 다음 계산식에 따라 글루코만난의 함량을 구한다.

 

공시험값 B(mg) ＝ 공시험 평균잔사무게(mg) - PB - AB

 

P_B : 공시험 단백질량(mg)

A_B : 공시험 회분량(mg)
 

함량(%) ＝	[검체의 평균 잔사무게(mg) - P - A - B]	×	100
	검체의 평균무게(mg)

 

P : 단백질량(mg)

A : 회분량(mg)

B : 공시험값(mg)
 

  시약 및 시액

    인산완충액(pH 6.0) : 인산이나트륨(무수) 1.4g 및 인산일나트륨(1수화물) 9.68g을 취하여 물 700mL에 녹인 후 물을 가하여 1,000mL로 한다.

    0.275N 수산화나트륨용액 : 수산화나트륨 11g을 물 700mL에 녹인 후 물을 가하여 1,000mL로 한다.

    0.325M 염산 : 1M 염산 325mL를 취한 다음 물을 가하여 1,000mL로 한다.

    텀아밀(Termamyl, 내열성알파아밀라아제)용액 : Novo사 No. 120L(냉장보존)

    프로테아제 : Sigma사 No. P-3910(냉장보존)

    아밀로글루코시다아제 : Sigma사 No. A-9913(냉장보존)

    셀라이트 C-211(Fischer사) : 산용액 세척